农药中毒后家蚕血液金属蛋白的差异分析及金属离子对其中毒症状的影响

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1、学校代码：10289分类号：S8密级：公开学号：122310017江苏科技大学硕士学位论文农药中毒后家蚕血液金属蛋白的差异分析及金属离子对其中毒症状的影响研究生姓名郭伟__________导师姓名武国华________申请学位类别农学硕士______学位授予单位江苏科技大学__学科专业特种经济动物饲养_论文提交日期2015年04月27日研究方向仪器分析在生物领域中的应用______________论文答辩日期2015年06月03日评阅人_____________________答辩委员会主席程嘉翎__________

2、2015年06月03日分类号：S8密级：公开学号：122310017农学硕士学位论文农药中毒后家蚕血液金属蛋白的差异分析及金属离子对其中毒症状的影响学生姓名郭伟指导教师武国华江苏科技大学二O一五年六月AThesisSubmittedinFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofAgricultureTheanalysisofthehomolymphmetalloproteindifferenceofthefifth-instarlarvaeunderpesti

3、cideandeffectsofmetallicelementsonthephoxim-inducedtoxicitysymptomoffifth-instarlarvaeandSubmittedbyGuoWeiSupervisedbyWuGuo-huaJiangsuUniversityofScienceandTechnologyJune,2015江苏科技大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体

4、已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：年月日江苏科技大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权江苏科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于：(1)保密□，在年解密后适用本授权书。(2)

5、不保密□。学位论文作者签名：指导教师签名：年月日年月日摘要摘要家蚕是一种重要的经济昆虫，属鳞翅目（Lepidoptera）蚕蛾科（Bombycidae）。辛硫磷是害虫防治中最常用的一种农药，其农药污染严重影响了蚕业经济的发展。金属元素在生物体系中起着重要的作用，在各种金属蛋白和金属酶中承担着重要的生物功能。金属组学是一门旨在研究生物体系内金属元素的分布、化学种态、含量、结构特性、功能等的新兴学科。金属蛋白是含有金属的蛋白，是金属组重要的组成部分，在生物体内中的蛋白质中大约有30%是金属蛋白或者含有金属元素，而这些金属

6、元素中大约有40%参与蛋白的生物学功能。金属蛋白的分离方法主要有液相色法谱和凝胶电泳法，而金属蛋白中金属元素的检测方法主要是借助于高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱（HPLC-ICP-MS）和激光烧蚀-电感耦合等离子体质谱（LA-ICP-MS）。本文分别采用体积排阻色谱和非变性凝胶电泳分离辛硫磷、溴虫腈和氯氰菊酯诱导后的家蚕血液金属蛋白，然后分别结合ICP-MS和LA-ICP-MS来检测蛋白质中的金属元素。结合上述所测得的金属元素变化对家蚕喂食FeCl2，CuCl2和RbCl来改善5龄家蚕的辛硫磷中毒症状；本文的主要

7、内容和结果有以下几个方面：1.采用体积排阻色谱（流动相为30mmol/LTris-醋酸，PH7.4，流速0.7mL/min，进样量50μm）对辛硫磷、溴虫腈和氯氰菊酯诱导后的5龄家蚕血液蛋白进行分离，然后与ICP-MS联用测定家蚕金属蛋白中的金属元素。结果显示，在此色谱条件下，家蚕血液蛋白质可以得到很好的分离，农药诱导组与空白组相比蛋白质色谱峰有一定的差异。结合HPCL-ICP-MS技术对家蚕血液结合金属蛋白的金属元素（Fe、Cu、Zn和Mn）进行检测，同时比较家蚕血液中的Fe、Cu、Zn和Mn结合金属蛋白在农药诱导

8、下的差异性。实验结果表明，家蚕血液中含有丰富的Fe、Cu、Zn和Mn结合金属蛋白，5龄家蚕在辛硫磷、溴虫腈和氯氰菊酯三种农药诱导下与空白组相比，含有Fe、Zn和Mn的结合金属蛋白含量明显降低，某些Cu结合金属蛋白色谱峰甚至检测不到。2.采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）对家蚕血液蛋白质进行分离，实验在低电流和低温度的条件下进行，然后对凝胶