具有毒死蜱降解特性的植物内生菌的分离筛选

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1、分类。一ＵＤＣｍ密级．禱硕±学位论文具有毒死婢降解特性的植物内生菌的分离節选作者姓名：冯发运指导教师：余向阳妍究员陈安良教授学科专业名称：森林保护学妍究方向：微生物学所在学院：林业与生物技术学院论文提交日期：２０１５年６月浙江农林大学〇—＾五年六月？二Ｉ９ZhejiangA&FUniversityDissertationfortheDegreeofMasterIsolationandidentificationofPlantendophytescapa

2、bleofdegradingchlorpyrifosCandiadate:FengFayunAdviser:YuXiang-yang,ResearcherChenAn-liang,ProfessorSpeciality:MicrobiologyDateofSubmission:June6,2015ZhejiangA&FuniversityLin’an,zhejiangprovince,P.R.ChinaJune,2015独创性声明本人声明，所呈交的学位论文，是在指导教师指导下，通过我的努力取得的成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中

3、作了标注和致谢中已经作了答谢的地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果，也不包含在浙江林学院或其他教育机构获得学位或证书而使用过的材料。与我一同对本研究做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意。如被查有严重侵犯他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。学位论文作者亲笔签名：日期：论文使用授权的说明本人完全了解浙江林学院有关保留、使用学位论文的规定，即学校有权送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。保密，在年后解密可适用本授权书。□不保密,本学

4、位论文属于不保密。□（请在方框内打“√”）学位论文作者亲笔签名：日期：指导教师亲笔签名：日期：摘要毒死蜱作为替代高毒有机磷农药的主要品种，在我国农业生产中使用量大且范围广，对农产品安全带来极大的隐患。植物内生菌是指一生或至少一生中的某个阶段能进入活体植物组织内，且不引起植物明显病理变化的微生物。与从土壤中分离微生物相比，植物内生菌能有效地在植物体内定殖，且不易受外界环境的影响。基于此，利用具有农药降解特性的植物内生菌加速农作物体内残留农药的代谢与降解，有望成为控制农药大量使用带来残留污染风险的新途径。本研究分别以从农药厂废液池旁采集的菊

5、科植物小飞蓬，以及韭菜和水稻为供试植物，采用表面消毒研磨法，以毒死蜱为单一碳源的无机盐培养基连续多代培养筛选毒死蜱降解内生菌，并对其在植物体外与体内的毒死蜱降解特性进行分析，采用生理生化测定结合16SrDNA序列分析对分离的内生细菌进行菌种鉴定。为进一步探索利用内生菌调节植物体内残留毒死蜱等环境污染物的降解机理研究建立基础，研究结果可为利用植物内生菌调控农产品农药残留提供理论指导，为农产品农药残留污染控制与治理提供新的思路。主要研究结果如下：1、从植物小飞蓬体内分离出一株阪崎克罗诺杆菌属（Cronobactersp.）植物内生细菌XFP

6、-gy，其对初始浓度为20mg/L的毒死蜱的9天降解率为77.28%。外加碳氮源可以促进XFP-gy的生长，并将其对毒死蜱5天降解率由69.59%提高到98.0%。菌株XFP-gy降解毒死蜱的最佳培养条件为30℃和pH为7.0。此培养条件下，增加培养液中原始接菌量，降低底物毒死蜱的初始质量浓度，可明显提高XFP-gy对毒死蜱的降解效率。2、从韭菜体内分离筛选出一株鞘氨醇单胞菌属（Sphingomonassp.）植物内生菌HJY，它在15天内可以代谢95.88%初始浓度为20mg/L的毒死蜱；1%的外加葡萄糖可以将其对毒死蜱的降解率提高到

7、6天98.48%；其最适毒死蜱降解条件为：毒死蜱初始浓度10mg/L，接菌量2%，pH6，培养温度30-35℃。3、从粳稻内分离出5株具有毒死蜱降解特性的植物内生菌：铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa)DG，巨大芽孢杆菌（Bacillusmegaterium）IDGB，鞘氨醇杆菌（SphingobacteriumCanadense）DJ，弯曲假单胞菌（Pseudomonas）DJA和短小杆菌属（Curtobacteriumplantarum）DJB。这些水稻内生菌除了在体外对毒死蜱具有一定的降解能力外，还可以转接入

8、粳稻内，通过产生吲哚乙酸(IAA)、溶解磷、产生氨基环丙烷羧酸（ACC）脱氨酶和载铁蛋白促进水稻植株的快速生长，并且加速水稻植株内，根部土壤中和稻谷内的毒死蜱降解。关键词：植物内生菌；毒死蜱；生物降解；分离