体外条件下柠檬酸处理对t.roseum的抑制及部分机理

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1、分类号密级UDC单位代码10733甘肃农业大学硕士学位论文体外条件下柠檬酸处理对T.roseum的抑制及部分机理CitricAcidInhibitsagainstTrichotheciumroseuminvitroanditsPartialMechanism燕璐指导教师姓名毕阳教授(甘肃农业大学兰州730070)朱艳讲师(甘肃农业大学兰州730070)学科专业名称农产品加工与贮藏工程研究方向采后生物技术论文答辩日期2015年5月30日学位授予日期2015年6月答辩委员会主席赵萍教授评阅人王婧副教授王俊龙副教

2、授2015年6月摘要I摘要粉红单端孢（Trichotheciumroseum）是重要的采后致病真菌，其寄主范围广，该病原物不仅造成严重的采后经济损失，还会在产品体内积累单端孢霉烯族毒素，导致安全隐患。柠檬酸作为重要的食品添加剂对多种细菌及真菌具有良好的抑制效果，但柠檬酸对T.roseum的抑菌效果及其作用机理尚未见报道。本文采用传统微生物学方法评价了柠檬酸对T.roseum孢子萌发、菌落直径和菌丝生长的抑制效果；采用细胞学方法测定了柠檬酸处理后孢子胞内物质释放量、麦角固醇含量以及质膜的完整性，观察了处理后菌

3、体和孢子的形态及超微变化；采用生化方法分析了胞内ROS代谢的变化。结果表明：1.柠檬酸能有效抑制孢子萌发、菌落直径和菌丝生长量，抑制效果与浓度呈正相关。20mM柠檬酸处理抑制效果显著，与对照相比，处理组的孢子萌发率下降了84.81%。同样，20mM柠檬酸处理组的菌落直径和菌丝干重分别比对照组降低了89.20%和86.46%。2.柠檬酸处理不仅促进了孢子胞内物质的释放，而且降低了菌丝的麦角固醇含量，10mM和20mM处理的麦角固醇含量仅分别为对照的38.48%和23.66%。PI染色结果表明，柠檬酸处理破坏了

4、孢子质膜的完整性，20mM处理组的破坏强度高于10mM处理。3.SEM观察发现，柠檬酸处理导致菌丝表面粗糙，出现树瘤状凸起，菌丝扭曲，部分菌丝表面倒塌，出现不规则分支。TEM观察结果表明，处理组孢子内部有空泡形成，质膜出现凹陷。当处理浓度为20mM时，质膜损伤程度加深，出现明显的缺口，细胞内容物外渗，甚至出现质壁分离。4.柠檬酸处理提高了孢子体内H2O2的含量，促进了孢子的脂质过氧化以及蛋白质的羰基化。柠檬酸处理后，菌丝体内的SOD、CAT和POD活性均明显升高。当添加外源抗氧化剂Vc后，柠檬酸处理孢子体内

5、的H2O2积累显著减少，脂质过氧化以及蛋白质的羰基化水平也在明显降低。综上所述，柠檬酸对T.roseum具有较强的抑制活性。该抑制活性与其破坏孢子和菌丝细胞膜的完整性、促进活性氧的积累、导致脂质过氧化以及蛋白质的羰基化等氧化损伤密切相关。关键词：柠檬酸，T.roseum，抑制，质膜，超微结构，ROS，氧化损伤II体外条件下柠檬酸处理对T.roseum的抑制及部分机理ABSTRACTTrichotheciumroseumisoneofimportantpathogensthatcausespost-harve

6、stlossesathighfrequencywhichholdsawiderangeofhost.Itwasreportedthatcitricacidpossessedantimicrobial,antifungicidalandharmlesscharacteristicswhichwereconsideredtohavegreatpotentialasantimicrobialagents.Therewerelittlereportsavailableontheunderlyingmechanism

7、ofantifungalfunctionofcitricacidagainstT.roseum.Thisstudyinvestigatedtheantifungalactionandpotentialanti-fungalmechanismsofcitricacid.Thestudyusetraditionalbiologicalmethodsevaluatedtheantifungalactivityofcitricacidonsporegermination,expansionofthecolonydi

8、ameterandandhyphalbiomass.Thecytologicalmethoddetectthereleaseofcellconstituents,ergosterolcontentandPIstainingindicatorsofcitricacidonplasmamembraneintegrityandobservethemorphologicalmodificationultrastructu