低剪切应力对血管内皮细胞自噬的影响及其机制的初步研究

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3、论文评阅人１：封々龙，教授，硕导，亩华大学评阅人２；王佐，教授，硕导，南华大学答辩委员会主席；义格波，教搜，博导，南华大学委员１；秦化平委，教授，硕导，南华大学员２：唐朝克，教授，博导，南华大学委员３：易化辉，教授，博导，南华大学委员４；刘录山，教巧，硕导，南华大学答辩日期：２０１５年５月１６曰低剪切应力对血管内皮细胞自噬的影响及其机制的初步研究摘要：[目的]观察低剪切应力对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)自噬的-/-影响并探讨其机制。[方法](1)apoE小鼠喂

4、饲高脂饮食，分别于0、4、8和12周处死，取主动脉窦部做冰冻切片，主动脉提蛋白。HE和油红O染色法观察动脉粥样硬化(Atherosclerosis,As)斑块病变；免疫组织化学法和Westernblot检测BECLIN1、LC3和P62以及TET2的蛋白表达；免疫荧光法观察5-mC和5-hmC的含量。(2)将HUVECs2置于体外灌流系统，分别以低剪切应力(5dyne/cm)和正常剪切应力2(15dyne/cm)处理1h，Westernblot检测BECLIN1、LC3和P62以及TET2的蛋白表达。再以巴伐洛霉素孵育2h，观

5、察LC3II/LC3I的比值。(3)低表达和高表达TET2质粒转染HUVECs，Westernblot检测BECLIN1、LC3和P62的蛋白表达。再以不同剪切应力处理1h，Westernblot检测BECLIN1、LC3、P62和ET-1及eNOS的蛋白表达。[结果]随着高脂饮食时间的延长，As病变程度逐渐加重。As病变进程中BECLIN1、LC3和P62的蛋白含量显著增加；TET2的蛋白表达明显降低；5-mC的含量显著增加，且其增加幅度显著高于5-hmC。与正常剪切应力组相比，低剪切应力组BECLIN1和LC3II/LC3

6、I的蛋白表达降低；自噬障碍标志物P62的蛋白表达增加；TET2的蛋白表达降低。巴伐洛霉素孵育2h后，低剪切应力组LC3II/LC3I无明显变化，而正常剪切应力组LC3II/LC3I明显增大。不同剪切应力处理I后，高表达TET2可以上调BECLIN1、LC3II/LC3I及eNOS的蛋白表达，下调P62及ET-1的蛋白表达；而低表达TET2可以下调BECLIN1、LC3II/LC3I及eNOS的蛋白表达，上调P62及ET-1的蛋白表达。[结论]低剪切应力下调血管内皮细胞TET2的蛋白表达从而抑制血管内皮细胞自噬。关键词：低剪切应

7、力；血管内皮细胞；自噬；TET2；动脉粥样硬化IITHEPRELIMINARYSTUDYOFTHEEFFECTANDMECHANISMOFLOWSHEARSTRESSONVASCULARENDOTHELIALCELLSAUTOPHAGYXiaohongLi(PathologyandPathophysiology)DirectedbyProf.DanghengWeiandA.P.ZhihanTangAbstract:[Objective]Toexploretheeffectoflowshearstresson-/-vascula

8、rendothelialcells(VECs)autophagy.[Methods]1.apoEmicewerefedwithhighfatdietfor0,4,8or12weeks.HEandoilredOstainingwereusedtodetectthepatholo