人胶质瘤中mirna-21及lncrna hotair的调控机制研究

《人胶质瘤中mirna-21及lncrna hotair的调控机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：R651学校代码：10062密级：学号：2012601113博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：人胶质瘤中miRNA-21及LncRNAHOTAIR的调控机制研究TITLEToStudytheRegulationMechanismofmiRNA-21andLncRNAHOTAIRinhumanglioma一级学科：临床医学二级学科：外科学神经外科论文作者：张开亮指导教师：康春生天津医科大学研究生院二〇一五年三月分类号：R651学校代码：10062密级：学号：201201113学位类别：科学学位□√专业学位

2、学科门类：医学博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：人胶质瘤中miRNA-21及LncRNAHOTAIR的调控机制研究TITLEToStudytheRegulationMechanismofmiRNA-21andLncRNAHOTAIRinhumanglioma一级学科：临床医学二级学科：外科学神经外科论文作者：张开亮指导教师：康春生导师组成员：天津医科大学研究生院二〇一五年三月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外

3、，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密√。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：年月日导师

4、签名：日期：年月日天津医科大学博士学位论文中文摘要目的:1.构建miR-21抑制剂的慢病毒系统以及PPARA和VHL的荧光素酶报告质粒，验证PPARA和VHL为miR-21的靶基因并阐述miR-21通过PPARA和VHL对EGFR信号通路调控的详细分子机制；在体内实验和体外实验中联合miR-21抑制剂和EGFR单克隆抗体--尼妥珠单克隆抗体治疗胶质瘤，为优化胶质瘤的基因治疗提供新的思路。2.利用生物信息学方法找出可能受lncRNAHOTAIR调控的信号通路，通过小分子抑制剂阻断以及表达载体构建等方法阐明LSD1复合物和PRC2复合物在lnc

5、RNAHOTAIR对胶质瘤细胞周期进展调控中的分子机制。方法：1.用表达miR-21抑制剂的慢病毒感染胶质瘤细胞系U87、LN229和U251，Westernblot方法检测EGFR、p-EGFR、AKT、p-AKT的表达水平变化；细胞克隆形成实验、细胞流式分析以及transwell实验检测miR-21对胶质瘤细胞增殖、细胞周期进展、细胞侵袭以及细胞凋亡的影响。2.通过靶点预测找出miR-21可能的靶点；荧光素酶报告实验验证PPARA和VHL为miR-21的靶基因；免疫荧光和蛋白质免疫共沉淀揭示β-catenin和PPARα之间的调控网络。

6、3.构建胶质瘤颅内动物模型，研究miR-21抑制剂和尼妥珠单抗联合应用的体内抑瘤效果。4.生物信息学分析HOTAIR可能调控的下游信号传导通路；利用含lncRNAHOTAIR干扰序列的慢病毒、EZH2小分子抑制剂DZNep、LSD1小分子抑制剂2-PCPA分别处理胶质瘤细胞U87和LN229，分析它们对胶质瘤细胞周期的影响。5.在敲低HOTAIR的U87和LN229细胞系中分别过表达HOTAIR的3’及5’结构域，验证siRNAHOTAIR引起的细胞周期阻滞能否部分恢复。6.构建颅内原位胶质瘤动物模型，检测HTOAIRsiRNA的体内抑瘤效

7、果。结果：1.感染miR-21抑制剂病毒的胶质瘤细胞中p-EGFR和p-AKT表达明显下调,细胞的增殖受到抑制，细胞周期被阻滞在G1期，细胞凋亡明显增加（p<0.01）。I天津医科大学博士学位论文2.Westernblot实验和荧光素酶报告实验证实VHL及PPARA为miR-21的直接作用靶点。3.感染miR-21抑制剂或转染VHL表达质粒均能降低经典型Wnt/β-catenin信号通路的活性。Westernblot和免疫荧光结果提示miR-21通过靶定PPARα进而上调转录因子AP-1的转录活性调节EGFR/AKT信号通路。4.蛋白质免疫

8、共沉淀结果证明β-catenin和AP-1能形成复合体，且复合体的形成受miR-21的调控。5.miR-21抑制剂联合尼妥珠单抗治疗胶质瘤效果优于单药治疗。6.生物信息学结果显示