人结肠癌耐药细胞株ht-295-fu的构建及基因表达谱变化

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1、分类号：密级：UDC：学号：406521612524南昌大学硕士研究生学位论文人结肠癌耐药细胞株HT-29/5-Fu的构建及基因表达谱变化Establishmentandgenesexpressionprofilingvariationofdrug-resistanthumancoloncancerHT-29/5-Fucellline邱婷婷培养单位（院、系）：南昌大学第一附属医院指导教师姓名、职称：熊建萍教授申请学位的学科门类：医学学科专业名称：肿瘤学论文答辩日期：2015年6月答辩委员会主席：评

2、阅人：2015年6月学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写）：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校有权保留并向国家有关部门

3、或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权北京万方数据股份有限公司和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务，同意按“章程”规定享受相关权益。学位论文作者签名（手写）：导师签名（手写）：签字日期：年月日签字日期：年月日论文题目姓名学号论文

4、级别博士□硕士□院/系/所专业E_mail备注：□公开□保密（向校学位办申请获批准为“保密”，年月后公开）I摘要摘要目的：采用人结肠癌HT-29为亲本细胞株，持续药物浓度递增法构建人结肠癌耐药细胞株，细胞学观察肿瘤细胞生物学特性变化，全人类基因组表达谱芯片分析比较两株细胞基因表达谱差异，初步探索结肠癌细胞中可能与5-Fu耐药相关的基因，为今后进一步研究耐药机制、筛选耐药分子标记物奠定基础。方法：1.采用5-Fu持续接触浓度梯度递增法构建人结肠癌耐药细胞株HT-29/5-Fu；2.观察耐药细胞株HT

5、-29/5-Fu的生物学特性：观察细胞形态变化和克隆形成率；MTT法测定生长曲线和药物敏感性；Westernblot分析胸苷酸合成酶（TS）、二氢嘧啶脱氢酶（DPD）的表达情况；流式细胞仪检测细胞周期和凋亡；3.利用全人类基因组表达谱芯片检测耐药细胞株HT-29/5-Fu及其亲本HT-29细胞差异表达的基因，并运用生物信息学的方法筛选出可能与5-Fu耐药相关的基因及通路。结果：1、历时10个月成功建立了能在1μg/mL5-Fu浓度下稳定生长的耐药细胞株HT-29/5-Fu；2、HT-29/5-Fu

6、耐药细胞的生物学特性发生改变，其耐药指数为3.59；与HT-29细胞相比，HT-29/5-Fu细胞形态发生改变，生长缓慢，克隆形成率降低，TS和DPD高表达，S期细胞比例增多，更能耐受5-Fu诱导的细胞凋亡。3、基因芯片结果显示：HT-29/5-Fu耐药细胞与其亲本HT-29细胞相比，共有211个差异表达的基因（变化倍数≥2或≤0.5），其中有115个基因表达上调（变化倍数≥2），96个基因下调（变化倍数≤0.5）。这些表达失调的基因中有17个基因已被报道过与各种化疗药物耐药相关，其中与5-Fu耐

7、药密切相关的基因包括编码5-Fu作用靶酶的TYMS、ABCG2、YES1和MDK。另外，某些差异表达的基因还与多药耐药（MDR）、上皮间质转化（EMT）、肿瘤细胞的增殖、侵袭、抗凋亡和细胞周期捕获等相关。GO（基因功能）分析结果显示上述差异表达基因在跨膜转运活性、信号转导活性、DNA结合以及转录因子活性等分子功能方面得到了富集。KEGG通路分析显示差异表达基因主要富集在了25条通II摘要路上，其中与肿瘤相关的有5条通路，分别为局部粘接、紧密连接、ABC转运体信号通路、P53信号通路以及细胞粘附分子

8、通路等。结论：1、本研究成功建立了HT-29/5-Fu耐药细胞株，其生物学性状发生了显著改变。2、人结肠癌耐药细胞株HT-29/5-Fu与其亲本HT-29细胞间的基因表达谱有较大的变化。为后续肿瘤耐药标记物的研究筛选提供前期基础和实验依据。关键词：结肠肿瘤；HT29细胞；氟尿嘧啶；抗药性；表达谱分析IIIAbstractABSTRACTObjectives:Toestablishdrug-resistanthumancoloncancercelllineinvitrowithits