乳酸杆菌对lps致敏小肠上皮细胞的免疫调节效应及机制研究

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1、分类号Ｓ８１６密级公开级ＵＰＣ５７９硕±学位论文乳酸杆茜对ＬＰＳ致敏小肠上皮细胞的免疫调节效应及机制研究作者姓名；髙侃指导教师：汪海峰教授学科专业名称：野生动植物保护和利用研究方向：动物营养所在学院：林业与生物技术学院论文提交日期：２０１５年４月８曰浙江农林大学２０１５年５月３１日ｒZhejiangA&FUniversityDissertationfortheDegreeofMasterImmunomodulationofLactobacillionintestinalepithe

2、lialcellsinducedbylipopolysaccharidesanditssignalingpathwayCandidate:GAOKanSupervisor:WANGHai-Feng,ProfessorSpeciality:WildFaunaandFloraProtectionResearchDirection:AnimalNutritionDateofSubmission:April8,2015ZhejiangA&FUniversityLin’an,ZhejiangProvince,P.R.ChinaMay,2015独创性声明本人声明，所呈交的学

3、位论文，是在指导教师指导下，通过我的努力取得的成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致谢中已经作了答谢的地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果，也不包含在浙江农林大学或其他教育机构获得学位或证书而使用过的材料。与我一同对本研究做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意。如被查有严重侵犯他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。学位论文作者亲笔签名：日期：论文使用授权的说明本人完全了解浙江农林大学有关保留、使用学位论文的规定，即学校有权送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其

4、他复制手段保存论文。保密，在年后解密可适用本授权书。□不保密,本学位论文属于不保密。□（请在方框内打“√”）学位论文作者亲笔签名：日期：指导教师亲笔签名：日期：摘要摘要益生菌广泛用于调节动物肠道健康，乳酸杆菌为应用最早、研究最多的益生菌菌种之一。乳酸杆菌通过其不同成分能够介导动物胃肠道免疫调节作用，发挥益生效应，然而其免疫调节机制仍不明了。鉴于此，阐明乳酸杆菌具有怎么样的肠道免疫调节功能，解析其免疫调节的信号通路及其关键靶点，将为益生菌免疫调节功能的开发提供科学依据，对筛选和培育高效乳酸杆菌等益生菌具有重要的实践意义。本试验旨在以公认的标准益生乳酸杆菌——鼠李糖

5、乳酸杆菌（LactobacillusrhamnosusGG，LGG）为代表，同时分离并获得LGG不同成分（表面蛋白SLP、胞外多糖EPS、基因组DNA以及人工合成的未甲基化CpGODN），分析LGG及其不同成分对人工致敏体外培养肠上皮细胞的免疫调节效应和免疫保护作用，查明乳酸杆菌对小肠上皮细胞信号通路的调控作用，解析乳酸杆菌实现免疫调节作用的信号通路靶点，阐明乳酸杆菌发挥肠道免疫调控作用的分子机制。与此同时，以LGG作为参考菌株，构建小鼠炎症模型研究猪源乳酸杆菌（高粘附菌株LactobacillusreuteriZJ617和低粘附菌株Lactobacillusr

6、euteriZJ615）对肠道的免疫调节作用，分析乳酸杆菌介导动物肠道免疫调节作用的机制。本研究主要采用大肠杆菌LPS分别诱导猪小肠上皮细胞系IPEC-J2细胞和C57BL/6小鼠产生免疫反应，构建炎症模型以评定乳酸杆菌的免疫调节作用。通过构7建猪小肠上皮细胞系IPEC-J2细胞脂多糖LPS炎症模型，采用2×10CFU/mLLGG或从LGG中分离纯化获得的不同成分（表面蛋白SLP、基因组DNA、胞外多糖EPS6以及人工合成的未甲基化CpGODN序列），分别预处理IPEC-J2细胞（1×10细胞/孔）4小时，再以脂多糖LPS刺激细胞。同时，通过构建C57BL/6小

7、鼠LPS炎症模8型，连续灌胃10CFU/mL乳酸杆菌（LGG、ZJ617或ZJ615）一周后，腹腔注射LPS诱发炎症。采用qRT-PCR技术检测IPEC-J2细胞和小鼠肠道组织致炎性细胞因子以及Toll样受体（TLR）的mRNA水平。采用Western-blot技术、免疫组化和免疫荧光技术分别检测IPEC-J2细胞和小鼠肠道组织中炎症相关信号通路（NF-κB信号通路和MAPK信号通路）主要靶点蛋白的表达水平。研究结果表明：1）与单纯LPS刺激猪肠上皮IPEC-J2细胞相比，LGG预处理IPEC-J2细胞后显著降低由LPS诱导的细胞致炎性细胞因子IL-6、IL-1

8、2、TNF-α和TLR受