也木勒白羊卵泡抑制素α亚基dna疫苗免疫原性及rna干扰效果初步研究

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1、分类号：密级：学号：2013408019单位代码：10759石河子大学硪士摩像铪弍也木勒白羊卵泡抑制素(X亚基DNA疫苗免疫原性及RNA干扰效果初步研究学位申请人黄增文指N教师吾热力哈孜•哈孜汗副教授赛务加甫教授中请学位类.别专业项士去业名称兽医研究领域兽医技术服务所在学院动物科技学院中囯•新疆•石河子2015年6月分类号：密级：学号：2013408019单位代码：10759石河子大学硕士学位论文也木勒白羊卵泡抑制素α亚基DNA疫苗免疫原性及RNA干扰效果初步研究学位申请人黄增文指导教师吾热力哈孜·哈孜汗副教授赛务加甫教授申请学位类别专业硕士专业

2、名称兽医研究领域兽医技术服务所在学院动物科技学院中国·新疆·石河子2015年6月PreliminarystudyonDNAvaccineimmunogenicityandRNAinterferenceofinhibinalphaofYeMuleAriessheepADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofAgricultureByHuangZeng-weng(VeterinaryServic

3、e)DissertationSupervisor:Prof.WuReHaZi·hazihanSaiWu-jiafuShihezi·Xinjiang·ChinaJune,2015石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。研究生签名使用授权声明本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留

4、学位论文并向国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文在学校图书馆保存并允许被查阅。有权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。研究生签名:时间：年6月豸曰导师签名时间：玉年6月f曰基金项目本研究由石河子大学科学技学术研究发展计划项目（项目编号：RCZX201107）提供资助。中文摘要抑制素(inhibin，INH)又称卵泡抑制素或性腺抑制素，是一种主要由卵巢颗粒细胞和睾丸支持细胞分泌产生的糖蛋白质激素，由一个α亚基和一个β亚基通过二硫键构成，其

5、中抑制素α亚基（INHα）是抑制素发挥生理功能必不可少的。抑制素主要生理功能是抑制促卵泡素(FSH)的释放，对雌性动物主要表现为调节卵泡的生成，增加成熟的优势卵泡数量；对雄性动物主要表现为促进精子的发生，提高睾丸的生精能力；还对雌雄动物共同表现为促使性成熟提前。因此，可通过调节抑制素α亚基基因在机体内的表达量，降低体内抑制素水平，促进卵泡发育和精子的生成，最终提高动物的繁殖力。目前主要通过两种途径降低动物体内抑制素的水平，其一是通过对动物进行主动或被动免疫抑制素原来使得机体内抑制素抗体含量增加，中和动物体内所分泌的抑制素，从而降低动物机体内的抑制

6、素水平；其二是通过RNA干扰技术下调抑制素α亚基基因mRNA水平上的表达，最终致使动物机体内所分泌抑制素的量相对减少，降低在动物体内的抑制素水平。本研究运用了生物信息学技术、基因克隆技术、蛋白质分析技术、基因免疫技术等以新疆塔城地区也木勒白羊卵泡抑制素α亚基作为选择基因，对目的基因主要进行以下几方面的研究试验：1、也木勒白羊卵泡抑制素α亚基基因的克隆及序列分析为了克隆和序列分析也木勒白羊抑制素α亚基基因，根据GenBank检索到的INHα亚基基因序列(GenBank号：XM_004004955.1)设计一对特异性引物，本试验采集发情期也木勒白羊卵

7、巢组织为研究对象，从中快速抽提总RNA作为模板。利用基因克隆技术和现代生物技术对也木勒白羊INHαcDNA进行克隆和测序及序列分析。测序及分析结果：也木勒白羊抑制素基因全长为1109bp，其中只含有1083bp组成开放阅读框(ORF)，其起始密码子为ATG，终止密码子为TAA，含完整的抑制素α亚基亚基序列编码区，共编码360个氨基酸残基。将所得序列提交到GenBank，获得登录号：KP-113678。2、也木勒白羊卵泡抑制素α亚基基因真核表达载体的构建对也木勒白羊抑制素α亚基基因进行克隆和序列分析的基础上，采用定向克隆技术，构建也木勒白羊卵泡抑制

8、素α亚基基因与绿色荧光蛋白基因融合表达载体pEGFP-INHα，并对所构建的真核表达载体pEGFP-INHα，运用菌液PCR、双酶切、测