一种防治柯萨奇病毒感染的新方法的研究

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1、；Ｖｆ，密级：保密期限：寺蓉乂爹硕±学位论文一种防治柯萨奇病毒感染的新方法的研究ＴｈｅＳｔｕｄｙｓｏｆＡＮｅｗＭｅｔｈｏｄｔｏＰｒｅｖｅｎｔａｎｄＣｕｒｅｎｆｅｃｔｉｏｎｏｆＣｏｘｓａｅｋｌｅｖｉｒｕｓＩ学号Ｄ１２３０３００５姓名张昕学位类别工程硕±学科专业王生将物＊ｉ丄Ｘ柱ｆ呈（工程领域）指导教师陈惠鹏完成时间２０１５年４月答辩委员＃主席签名ＬＪ独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研

2、究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加从标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发誠撰写边的研究成果，也不包含为获得安歓学或其他教育机巧的学位或证书而使用边的材料一同工作的同志对本研究所做的任何。与我贡献均已在洽文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：＾白＾签字日期：年＾月处日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解安徽大学有关保留、使用学位论文的规定，有校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查网和借阅。本人授权安徽大学可＾义陪学位论文的全部或

3、部分内容编入有关数据库进行Ｌ！检索，可乂采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、方：编学位论文。（保密的学位洽文在解密后适用本授权书）：学位论文作者签名：导师签名０心＞签字日期：氏年ｙ月＞日签字日期：年月日＾摘要ＶＹ一ｃｋｉｅｉｒｕｓ，Ｃ）是种人类病毒ＲＮＡ柯萨奇病毒（Ｃｏｘｓａ，其归属在小病毒科（Ｐｉｃｏｍａｖｉｒｉｄａｓ）中的肠道病毒属（Ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓ，ＥＶ）。本研究中用到的是柯萨奇病毒的一种很重要的亚型之一奇病毒Ｂ组３型病毒，柯萨（ｃｏｘｓａｃｋｉｅｖｉｒｕｓＢ３，

4、ＣＶＢ３）。它在临床上能引起急慢性也抓炎和膜腺炎，发病率和病死率很高，特别是对于婴幼儿及新生儿来说是高易感疾病新生儿及幼儿的病患较多，。虽然成人患病相对较少严重威胁着婴幼儿的健康及生存，一但是，同样非常严重，而且至今没有特效的药物或防治措施旦发病。一因此，本研巧针对ＣＶＢ３感染的防治策略进行了探索，希望能探究出条新的比较有效的防治途径。本研究首先用基因合成ｅ－３进、拼接等分子生物学实验方法对天然Ｃａｓｐａｓａｓａｓｅ－行了改造，设计出了含３Ｃ蛋白酶酶切位点的Ｃｐ３的基因，成功构建了－ａｓａｓｅ

5、－ｔ通路３Ｃ蛋白酶重组Ｃｐ３细胞调，利用３Ｃ蛋白酶的酶切活性在细胞内ａｓｅ－３激活Ｃａｓ信号调亡通路，从而诱导感染细胞发生调亡ｐ。该工作分别构建了真核表达载体，即质粒、腺病毒表达载体和慢病毒表达载体，递送入哺乳细，检测了其表达产物及细胞毒性Ｂａ化／Ｃ郭鼠胞内。之后分别在哺乳动物细胞及上进行防治ＣＶＢ－感染效果的验证。结果显示，重组Ｃａｓｐａｓｅ３对细胞感染ＣＶＢ３３具有保护作用，并且对Ｂａｌｂ／ｃ現鼠感染ＣＶＢ３也具有保护作用。同时，，为了这条途径最终能应用于人类病毒感染的防治Ｗ求找出最佳的一－基因

6、载体能起到更好的防治病毒的效果，。我们对Ｃａｓｐａｓｅ３进步地改造成ＤＮＡ＋－ｔ－－－－功构建了质粒ｐｃ３．１ｒｅｃｏｍｂｉｎａｉｏｎｓｉｎａｌｅｔｉｄｅｃａｓａ化３６Ａａ（Ｗ下简（）ｇｐｐｐ称为ｐ－ｒｃ－ｓ－－ｉｇ６），又相继获得了含有改造Ｃａｓｐａｓｅ３的基因的腺病毒基因载体Ａｄ－－－－Ａｄ－－ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎＣａｓｐａｓｅ３６Ａａ（下简称为ｒｃ６）和Ａｄ－ｒｅｃｏ－Ｃａｓａ－－８Ａａ－－８）ｍｂｉｎａｔｉｏｎｐｓｅ３下简称为Ａｄｒｃ及慢病毒基因表达载体ＬＶ－ｒｅｃｏｍｂ－－

7、－－－－－ｉｎａｔｉｏｎｓｉｇｎａｌｐｅｐｔｉｄｅＣａｓｐａｓｅ３６Ａａ（Ｗ下简称为ＬＶｒｃｓｉｇ６）。我们首先在哺乳动物细胞上进行了质粒、腺病毒基因载体及慢病毒基因载体的表达验证及抑制病毒感染的验证，继而又在乳鼠身上进行了腺病毒基因载体及慢病毒基因载体抑制病毒感染的验证，，证实了这条通路是可行的并且还具有广泛的实用性。Ｉ一种防治柯萨奇病毒感染的新方法的研究一一些探索我们在此做出了，希望能为Ｗ后该条通路应用于临床实验提供些参考。这条通路的提出，为ＣＶＢ３感染的防治及其治疗药物的研发提

8、供了新的途径和思路，同时也为其它病毒的防治方法提供了借鉴意义，具有十分广阔的应用前景。－：，，关键词柯萨奇病毒，防治，３Ｃ蛋白酶Ｃａｓｐａｓｅ３，基因载体调亡信号通路ＩＩＡｂ巧巧ｃｔＡｂｓｔｒａｃｔＣｏｘｓａｃｋｉｅｖｉｒｕｓ目３（ＣＶＢ３