tmem16a和tmem16b在cci模型鼠drg神经元上的表达

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1、分类号：密级：学号：2012109007单位代码：10759石河子大学硕士学位论文TMEM16A和TMEM16B在CCI模型鼠DRG神经元上的表达学位申请人田镇溥指导教师李丽申请学位门类级别理学硕士学科、专业名称神经生物学研究方向慢性痛的机制研究所在学院医学院中国·新疆·石河子2015年5月TMEM16AandTMEM16BexpressiononDRGneuronsinCCImodelratADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInPartialFulfillmentoftheRequirementsf

2、ortheDegreeofMasterofNaturalScienceByTianZhenpu(Neurobiology)DissertationSupervisor:AssociateProf.LiLiMay,2015摘要目的：比较正常大鼠、坐骨神经压榨性损伤（ChronicConstrictionInjury，CCI）模型鼠及不同浓度尼氟灭酸（NiflumicAcid，NFA）干预后的CCI模型鼠的热缩足反射潜伏期（ThermalWithdrawalLatency,TWL）的改变，及各组大鼠DRG神经元上TMEM16A和TMEM16B的mRNA

3、水平和蛋白表达的改变，旨在探讨钙激活氯通道（calcium-ctivatedchloridechannels，CaCCs）在神经病理性痛（Neuropathicpain，NPP）中的调节作用。方法：制作CCI模型；运用热板实验分别在术前1d，术后第1、3、5、7、9、12、14d检测正常大鼠、CCI模型鼠及10μM、50μM和300μM的NFA干预后的CCI模型鼠的TWL；运用免疫荧光实验技术检测TMEM16A和TMEM16B在正常大鼠DRG上的分布；运用RT-PCR技术和WesternBlot技术分别检测各组大鼠的DRG神经元上，TMEM16A和

4、TMEM16B的mRNA水平和蛋白表达。结果：（1）CCI模型鼠较正常大鼠TWL明显缩短（P<0.01，n=6），给予10μM、50μM和300μM的NFA干预后与CCI组相比TWL均明显延长（P<0.01,n=6），其中50μM的NFA干预组较10μM的NFA干预组的TWL也明显延长（P<0.01,n=6），但300μM的NFA干预组和50μM的NFA干预组之间的TWL无统计学差异。（2）免疫荧光显示在正常大鼠DRG中，TMEM16A和TMEM16B主要表达在DRG神经元上。（3）运用RT-PCR技术发现CCI模型鼠较正常大鼠DRG神经元上的TM

5、EM16A的mRNA水平明显上调（P<0.01，n=6），CCI模型鼠给予NFA干预后DRG神经元上的TMEM16A的mRNA水平显著下调（P<0.01，n=6），随着NFA干预浓度的增加，TMEM16A的mRNA水平呈浓度依赖性的下调（P<0.01，n=6）；CCI模型鼠DRG神经元上的TMEM16B的mRNA水平明显下调；给予NFA干预后TMEM16B的mRNA水平显著上调（P<0.01，n=6），随着NFA干预浓度的增加，TMEM16B的mRNA水平呈浓度依赖性的上调（P<0.01，n=6）。（4）运用WesternBlot技术发现CCI模型

6、鼠与正常大鼠相比，DRG神经元上的TMEM16A的表达明显上调（P<0.01，n=6），CCI模型给予NFA干预后，DRG神经元上的TMEM16A的表达明显下调（P<0.01，n=6），随着NFA干预浓度的增加，TMEM16A的表达呈浓度依赖性的下调（P<0.01，n=6）；CCI模型鼠DRG神经元上的TMEM16B的表达明显下调；给予NFA后，TMEM16B的表达显著上调（P<0.01，n=6），随着NFA干预浓度的增加，TMEM16B的表达呈浓度依赖性的上调（P<0.01，n=6）。结论：NFA干预后CCI模型鼠DRG神经元上的TMEM16A和

7、TMEM16B在转录和翻译水平均发生改变，提示TMEM16A和TMEM16B可能共同参与了神经病理性痛的产生。关键词：钙激活氯通道；TMEM16A；TMEM16B；NFA；DRG论文类型：A(基础研究)IAbstractObjective:TocomparedifferentconcentrationNFAinterventionafterCCImodelrat,CCImodelratandnormalratofThermalWithdrawalLatency(TWL)changes;TMEM16AandTMEM16BlevelsofRNAandp

8、roteinexpressionchangesinDRGneurons.Aimedtoexploremediationro