sirt1抑制氧化低密度脂蛋白在血管内皮细胞聚集的作用及机制研究

《sirt1抑制氧化低密度脂蛋白在血管内皮细胞聚集的作用及机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、SOOCHOWUNIVERSITY硕士学位论文论文题目SIRT1抑制氧化低密度脂蛋白在血管内皮细胞聚集的作用及机制研究研究生姓名余小艳指导教师姓名曹勇军，张艳林专业名称神经病学研究方向脑血管病基础与临床论文提交日期2015年3月苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均己在

2、文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：令小社日期：苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研宄所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版〉电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文挡，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据

3、库进行检索。涉密论文口本学位论文属在____年_月解密后适用本规定。非涉密论文口论文作者签名：玫日期：导师签名、^日期：SIRT1抑制氧化低密度脂蛋白在血管内皮细胞聚集的作用及机制研究中文摘要SIRT1抑制氧化低密度脂蛋白在血管内皮细胞聚集的作用及机制研究中文摘要背景和目的：氧化低密度脂蛋白(oxidizedlow-densitylipoprotein,ox-LDL)与动脉粥样硬化形成密切相关。自噬在人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcells,HUVECs)中有降解ox-

4、LDL的作用。Sirtuin1(SIRT1)，一种新型抗动脉粥样硬化因子，是哺乳动物沉默信号调节因子2的同源物，对细胞的生存、代谢等生理活动起着十分重要的调节作用，可能是所有生物共同的寿命控制基因之一，并且有诱导自噬作用。本文研究SIRT1对HUVECs内ox-LDL聚集的影响，并初步探讨其作用是否与其促进ox-LDL自噬性降解有关。方法：1.流式细胞仪检测SIRT1抑制剂尼克酰胺(nicotinamide,NAM)和激动剂白藜芦醇(resveratrol,RSV)对Dil-ox-LDL在HUVECs聚集的影响；利

5、用SIRT1小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA)转染构建SIRT1siRNA内皮细胞模型，并用流式细胞仪检测其对Dil-ox-LDL在HUVECs聚集的影响。2.利用自噬相关基因Atg5小干扰RNA转染构建Atg5siRNA内皮细胞模型，流式细胞仪检测其对白藜芦醇抑制Dil-ox-LDL在HUVECs聚集的影响；采用蛋白免疫印迹方法检测自噬流相关蛋白LC3、p62的蛋白含量，并用GFP-LC3质粒转染技术在荧光显微镜下观察各组LC3荧光点的数目；通过免疫荧光技术观察HUVECs中Dil

6、-ox-LDL与溶酶体标志物Lamp1和CathepsinD的共定位情况。结果：1.流式细胞术检测结果显示SIRT1siRNA和NAM增加HUVECs中Dil-ox-LDL的荧光强度，RSV减少HUVECs中Dil-ox-LDL的荧光强度。I中文摘要SIRT1抑制氧化低密度脂蛋白在血管内皮细胞聚集的作用及机制研究2.敲减Atg5增加HUVECs中Dil-ox-LDL的荧光强度；与RSV组相比，Atg5siRNA和RSV组的HUVECs中Dil-ox-LDL荧光强度增加。3.免疫印迹结果显示ox-LDL升高LC3-I

7、I和p62的蛋白表达，与单独ox-LDL组相比，SIRT1siRNA+ox-LDL组和NAM+ox-LDL组LC3-II的蛋白表达降低，p62蛋白水平升高，RSV+ox-LDL组LC3-II的蛋白表达升高，p62蛋白水平降低。运用GFP-LC3质粒转染技术在荧光显微镜下观察发现SIRT1siRNA和NAM减少LC3点状物数目，RSV增加LC3点状物数目。4.免疫荧光结果显示Dil-ox-LDL与Lamp1及CathepsinD部分共定位，与Dil-ox-LDL单独组相比，SIRT1siRNA和NAM减少Dil-ox

8、-LDL和Lamp1及CathepsinD共定位程度，RSV增加Dil-ox-LDL和Lamp1及CathepsinD共定位程度。结论：SIRT1抑制剂及敲减SIRT1基因增加ox-LDL在HUVECs中的聚集，SIRT1激动剂则减少ox-LDL在HUVECs中的聚集，SIRT1的这种调控作用与其对自噬溶酶体途径的调节有关。关键词：SIRT1；氧化低密度脂蛋