rhl抑制大鼠肝纤维化及lx2细胞增殖的研究

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1、中图分类号：R285.5论文编号：HBLG2015-001UDC：密级：公开硕士学位论文RHL抑制大鼠肝纤维化及LX2细胞增殖的研究作者姓名：郝晓方学科名称：病原生物学研究方向：赖氨大黄酸防治肝纤维化研究学习单位：华北理工大学学习时间:3年提交日期:2015年5月10日申请学位类别：理学硕士导师姓名：章广玲教授单位：华北理工大学基础医学院甄永占教授单位：华北理工大学基础医学院论文评阅人：匿名单位：匿名单位：论文答辩日期：2015年5月30日答辩委员会主席：汤华教授关键词：赖氨大黄酸；胆汁淤积；肝纤维化；肝星形细胞；TGF-β1；α-SMA唐山华北理工大学2015年6月TheIn

2、hibitoryEffectofRHLonLiverFibrosisinRatsandProliferationofLX2CellsDissertationSubmittedtoNorthChinaUniversityofScienceandTechnologyinpartialfulfillmentoftherequirementforthedegreeofMasterofScicncebyHaoXiaofang(PathogenicOrganisms)Ph.DZhangGuanglingSupervisor:Ph.DZhenYongzhanJune,2015独创性说明本人郑

3、重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得华北理工大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。论文作者签名：日期：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解华北理工大学有关保留、使用学位论文的规定，即：已获学位的研究生必须按学校规定提交学位论文，学校有权保留、送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以将学位论文的全部或部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行

4、公开、检索和交流。作者及导师同意论文公开及网上交流的时间：□自授予学位之日起；□自年月日起。作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日摘要摘要目的探讨赖氨大黄酸(RHL)对大鼠胆汁淤积性肝纤维化的抑制作用，进一步阐明其作用的可能分子机制；在体内实验基础上体外培养人肝星形细胞（HSC）株，探讨RHL抑制HSC增殖的可能作用机制；为RHL防治胆汁淤积性肝纤维化的研究提供实验依据。方法1体内试验：（1）随机将42只大鼠分为假手术组、模型组、35mg·kg-1、70mg·kg-1RHL治疗组、大黄酸组及赖氨酸组，每组7只，采用胆总管结扎(BDL)手术建立胆汁淤积性肝纤维化大鼠

5、模型。（2）使用全自动生化分析仪检测各组大鼠血清中天冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、总胆汁酸（TBA）、总胆红素（TBIL）水平。（3）HE染色对各组大鼠肝脏组织行病理学检查；Masson三色染色观察各组大鼠肝组织纤维组织含量与分布；使用试剂盒通过酶标仪测定各组大鼠肝组织中羟脯氨酸（Hyp）水平；免疫组织化学染色检测各组大鼠α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达部位。（4）RT-PCR检测各组大鼠肝组织中转化生长因子β1（TGF-β1）和α-SMAmRNA表达水平；Westernblotting检测各组大鼠肝组织中TGF-β1和α-SMA蛋白相对表达量。2

6、体外实验：（1）体外培养HSC-LX2细胞，实验分成对照组、50μmol·l-1、100μmol·l-1和150μmol·l-1RHL用药组。（2）采用CCK-8法检测不同浓度的RHL对HSC-LX2细胞活化和增殖的抑制作用。（3）Westernblotting检测用不同浓度的RHL处理48小时后HSC-LX2细胞中TGF-β1和α-SMA蛋白相对表达量。结果1体内试验：（1）与假手术组比较，模型组大鼠肝脏质量与体质量比、血清中AST、ALT、TBA和TBIL水平升高，差异有统计学意义（P＜0.05）；肝组织肝小叶结构被破坏，胆管显著增生并伴纤维大量增生；Hyp水平升高，差异有

7、统计学意义（P＜0.05），免疫组织化学染色显示α-SMA着色于胞膜和胞浆且表达增多；RT-PCR和Westernblotting结果显示模型组大鼠TGF-β1、α-SMAmRNA和蛋白表达水平升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。（2）与模型组比较，35、70mg·kg-1RHL治疗组和大黄酸组，大鼠肝脏质量与体质量比、血清中AST、ALT、TBA和TBIL水平降低，差异有统计学意义（P＜0.05）；肝脏病理组织学检查提示35、70mg·kg-1RHL治疗组和大黄酸组大鼠肝小叶结构尚完整