glut9基因启动子区痛风易感snp位点功能的研究

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1、分类号：R587.1密级：不保密UDC：610学校代码：11065硕士学位论文GLUT9基因启动子区痛风易感SNP位点功能的研究朱雪莲指导教师李长贵教授学科专业名称内科学（内分泌与代谢病）论文答辩日期2015年5月31日摘要目的：前期研究发现人葡萄糖转运蛋白9(GLUT9)基因启动子区SNPrs13124007位点G/C与中国汉族男性的痛风易感性显著相关。本研究拟进一步开展功能研究探讨该SNP是否通过影响GLUT9基因启动子的活性，进而引起痛风发生。方法：PCR扩增包含GLUT9基因启动子区SNPrs1312400

2、7位点在内的DNA片段，构建野生型（pGL3-basic-GLUT9/G）和突变型（pGL3-basic-GLUT9/C）质粒，将质粒瞬时转染至293T细胞使其在细胞内表达，通过双荧光素酶报告系统研究SNPrs13124007G/C对GLUT9启动子区激活能力的影响，通过凝胶迁移率（EMSA）实验观察两种等位基因型探针转录因子结合情况。结果：重组质粒经测序鉴定，证明目的片段已成功插入，且序列方向正确，重组质粒构建成功。双荧光素酶报告系统显示pGL3-basic-GLUT9/C较pGL3-basic-GLUT9/G对

3、启动子激活能力下降(P0.05)。EMSA结果显示rs13124007位点等位基因为C时较等位基因G缺少转录因子IRF-1结合位点，且可能致原有转录因子结合活性发生变化或产生新的转录因子结合序列。结论：GLUT9基因启动子区SNPrs13124007通过影响启动子的活性进而影响GLUT9基因的表达，这一作用有可能是通过IRF-1实现的，对深入理解中国汉族男性痛风的发生机制提供理论基础。硕士研究生：朱雪莲(内分泌与代谢病)指导教师：李长贵教授关键词：痛风；GLUT9；rs13124007AbstractObject

4、ives:PreviousstudieshaveshownthattheGtoCsubstitutionofrs13124007locatedintheputativepromoterregionofglucosetransporter9(GLUT9),issignificantlyassociatedwithgoutsusceptibilityinHanChinesemales.Here,weinvestigatethepotentialmechanismsunderlyingassociationbetween

5、thispolymorphismandgoutrisk.Methods:SpecificfragmentsincorporatingtheGLUT9rs13124007polymorphismwereobtainedbypolymerasechainreaction(PCR),andclonedintoaluciferasereportervectortoconstructthewild(pGL3-basic-GLUT9/G)andmutant(pGL3-basic-GLUT9/C)recombinant.Ther

6、ecombinantweretransienttransfectedinto293Tcellstoexpress.Differencesinpromoteractivitiesweretestedbydual-luciferaseactivityassay.Electrophoreticmobilityshiftassay(EMSA)wasalsoperformedtodeterminedifferencesintranscriptionfactorbindingactivitiesbetweenGandCalle

7、les.Results:BysequencedtherecombinantcontainedboththesequenceofpGL3-basicandthatofrs13124007ofhumanGLUT9genepromoter.Thesegmentinsertedwasinthecorrectdirection.Dual-luciferaseactivityassaysshowedsignificantreductionsintranscriptionalefficiencywiththeCcomparedw

8、ithGallele(P0.05).Furthermore,EMSAdemonstratedthattheCandGalleleshavedifferentaffinitiesforspecifictranscriptionfactors,andsuggeststhattheGtoCsubstitutionofrs13124007causesIRF-1bi