egf相关因子和tgf-β1对人颗粒细胞排卵相关基因表达及相关信号通路的调控作用研究

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1、学校代码10459学号或申请号201111440183密级公开博士学位论文EGF相关因子和TGF-β1对人颗粒细胞排卵相关基因表达及相关信号通路的调控作用研究作者姓名：方兰兰导师姓名：孙莹璞学科门类：医学专业名称：生殖医学培养院系：第一临床学院完成时间：2015年3月AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofDoctorTheroleofEGF-likegrowthfactorsandTGF-β1intheregulationofovulation-relatedgenese

2、xpressioninhumangranulosacellsandtheunderlyingmolecularmechanismPhDCandidate:LanlanFangSupervisor:YingpuSunMajor:ReproductivemedicineAffiliation:TheFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityMarch,2015原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不包含任何其

3、他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：曰期:>斗J月4曰学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以釆用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位

4、论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：4I羞曰期爿年^月十日摘要EGF相关因子和TGF-β1对人颗粒细胞排卵相关基因表达及相关信号通路的调控作用研究1博士研究生：方兰兰1导师：孙莹璞2联合培养导师：PeterC.K.Leung1郑州大学第一附属医院生殖医学中心河南郑州4500522DepartmentofObstetricsandGynaecology,Child&FamilyResearchInstitute,UniversityofBritishColumbia,V

5、ancouver,BritishColumbia,CanadaV5Z4H4摘要第一部分研究背景排卵障碍是导致不孕症发生的一个重要因素。虽然很多动物实验已经证明表皮生长因子（Epidermalgrowthfactor，EGF）相关生长因子，特指双调蛋白（Amphiregulin，AREG）、β细胞素（Betacellulin，BTC）和表皮调节素（Epiregulin，EREG），通过调控环氧合酶-2（Cyclooxygenase-2，COX-2）及其作用下的前列腺素E2（ProstaglandinE2，PGE2）的生成调节排卵的发生，

6、但在人颗粒细胞未见相关研究。研究目的研究AREG、BTC和EREG在人颗粒细胞是否促进COX-2的表达及其作用下的PGE2的生成。I摘要研究方法采用SVOG细胞系研究AREG、BTC和EREG在人颗粒细胞排卵过程中的调节作用。SVOG细胞系是一株使用SV40T抗原转染人颗粒细胞得到的细胞系。分别采用RT-qPCR和westernblotting进行mRNA和蛋白的检测。通过酶联免疫法（Enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA）检测培养液中的PGE2水平。结果外源性给予LH促进AREG、BTC、EREG

7、、COX-2和PGE2的表达上调；使用EGF受体（EGFReceptor，EGFR）小干扰RNA（SmallinterferingRNA，siRNA）转染方法敲除EGFR阻断LH上调的COX-2表达及其作用下的PGE2的生成；AREG、BTC、EREG通过活化ERK1/2信号通路促进COX-2表达及其作用下的PGE2的生成，使用EGFR抑制剂或EGFRsiRNA抑制EGFR活性或敲除内源性EGFR表达可以阻断这种上调作用。结论AREG，BTC和EREG通过活化ERK1/2信号通路促进人颗粒细胞COX-2的表达及其作用下的PGE2生成。

8、第二部分研究背景COX-2及其作用下的PGE2是调控排卵发生的关键因素。转移生长因子-β（Transforminggrowthfactor-beta，TGF-β）超家族不仅在卵巢组织分布广泛，而且在调控卵巢各种生理和病理