dok2对胃癌细胞生物学行为的影响及其与胃癌预后的关系

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1、暨南大学硕士学位论文DOK2对胃癌细胞生物学行为的影响及其与胃癌预后的关系TheinfluenceofDOK2onthebiologicalbehaviorofgastriccancercellsanditsrelationshipwiththeprognosisofgastriccancer作者姓名：焦金霞指导教师姓名及学位、职称：马三梅博士副教授学科、专业名称：细胞生物学学位类型：学术学位论文提交日期：2015年6月论文答辩日期：2015年5月29日答辩委员会主席：李宏业论文评阅人：王永飞、尉秀清学位授予单位和日期：暨南大学2015年6月24

2、暨南大学硕士研究生学位论文DOK2对胃癌细胞生物学行为的影响及其与胃癌预后的关系0B摘要研究背景：胃癌是一种消化道恶性肿瘤，包括我国在内的东南亚国家属于胃癌的高发病率区域。近年来，80％以上的胃癌诊断发生在疾病的中晚期阶段，用于肿瘤治疗的主要手段如手术、放疗和化疗对部分晚期患者已然无能为力，很容易出现反复发作或者病灶转移是主要的原因。尽管医疗科研人员一直致力于改善胃癌的预防、诊断和治疗，但是患者的总生存期进展不佳，术后5年生存率仅30%左右。因此，如何抑制肿瘤的发生发展和改善肿瘤预后是肿瘤治疗的关键之一。胃癌的发生发展是一个多种因素引发、多步骤控

3、制且多阶段发生的过程，其主要特征表现为原癌基因的激活和抑癌基因的失活。表观遗传学的改变，特别肿瘤相关基因的改变，是肿瘤演变过程中的重要部分。在类染色体8P21.3上的DOK2是本文研究的重点。目前，DOK2作为一种肿瘤抑制基因在卵巢癌、肺腺癌、大肠癌和乳腺癌中均有研究。且DOK2可作为患者根治性切除胃癌后不良预后的一种指标。本文将对胃癌发生与发展过程中DOK2基因的作用进行研究。目的：检测人胃癌组织中DOK2基因的表达，并分析其过表达后对胃癌细胞BGC823增殖能力、克隆形成能力和悬浮非依赖能力的影响，探讨其临床意义。方法：1RT-PCR法检测D

4、OK2在7个人胃癌细胞株（AGS、BGC-823、SGC7901、MKN28、NCI-N87、MKN45、SNU1）及正常胃组织中的表达。2确定BGC823稳定转染的最适G418杀伤浓度。3构建重组质粒pcDNA3.1-DOK2和pcDNA3.1空载体，Lipo2000介导下转染至胃癌细胞BGC-823中，RT-PCR法及WesternBlot检测DOK2基因在细胞BGC823中的表达。4采用平板集落形成、CCK8法和软琼脂克隆形成实验检测过表达DOK2基因对BGC823生物学行为的影响。5免疫组织化学法检测116例胃癌组织和18例癌旁组织中DO

5、K2蛋白的表达，并I暨南大学硕士研究生学位论文分析其与胃癌临床病理学特征及预后的关系。结果：1DOK2在正常胃组织的mRNA表达水平显著高于胃癌细胞。2BGC823的G418最佳筛选浓度为500μg/ml。3建立了稳定过表达DOK2和空载体对照的BGC823细胞系。4平板集落形成、CCK8法和软琼脂克隆形成实验结果均显示过表达的DOK2基因对BGC823细胞的生物学行为有显著抑制作用。5DOK2蛋白的低表达在胃癌组织中占62.93%，DOK2蛋白表达与胃癌临床病理学特征如淋巴结转移、浸润深度以及分化程度显著相关；而患者预后的生存时间与胃癌浸润深度

6、、DOK2蛋白的表达、淋巴结转移、是否远处转移以及分化程度密切相关。结论：1DOK2在人胃癌组织及胃癌细胞株中低表达或者表达缺失。2DOK2对胃癌细胞BGC823的生物学行为如增殖、克隆形成和悬浮非依赖能力有显著的抑制作用。3DOK2表达与胃癌患者预后相关。关键词：胃癌；DOK2；BGC823；生物学行为；预后II暨南大学硕士研究生学位论文TheinfluenceofDOK2onthebiologicalbehaviorofgastriccancercellsanditsrelationshipwiththeprognosisofgastricc

7、ancer1BAbstractBackground:Gastriccancerisagastrointestinalcancer,especiallyinSouth-EastAsiancountries,includingChina.Inrecentyears,morethan80%ofgastriccancerdiagnosisoccurredinthelatestagesofthedisease,theprimarymeansforcancertreatmentsuchassurgery,radiotherapyandchemotherapy

8、inpatientswithadvancedpartalreadypowerless,orrecurrence,metastasis,i