crgd-羧甲基壳聚糖—软脂酸聚合物胶束的制备及体内外抗肿瘤药效学研究

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1、襄仰火鲁ＳＯＯＣＨＯＷＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ博±学位论文－论文题目ｃＲＧＤ－媛甲基壳聚糖软脂酸聚合物胶束的制备及体内外抗肿瘤药效学硏究研究生姓名周晓峰指导教师姓名张学农专业名称放射医学研究方向核表示糕巧术在纳朱给巧系统中的应用论文提交日期２０１５年１０月Ｉ．Ｉ．苏側大学学位论文独擲牲齊明本人郑重声明；所提交的学较絶文是本人在导师辕繪导下＊敎立迸巧巧究工作所取游的盛栗＊藤文中Ｂ经渡巧弓佛的巧容外，本论义不禽其推个人或藥体邑錢发

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4、almiticacid-carboxymethylchitosan，cRGD-CMCH-PA)，并以其为载体，包载模型药物紫杉醇(paclitaxel，PTX)，制备cRGD修饰的羧甲基壳聚糖软脂酸载紫杉醇胶束(cRGD-CMCH-PA/PTX)，利用cRGD的靶向作用和载体材料的pH敏感性，提高抗肿瘤效果。方法(1)通过亲电取代反应使壳聚糖羧甲基化，以酰胺基化反应接枝软脂酸1和cRGD，合成CMCH-PA和cRGD-CMCH-PA。(2)通过FT-IR、H-NMR对聚合物结构进行表征，以芘荧光探针

5、法测定其在不同pH的PBS溶液中的临界胶束浓度(Criticalmicellarconcentration，CMC)；薄膜分散法制备空白胶束，测定其在不同pH下的粒径和电位。(3)通过MTT实验和溶血性试验对载体的安全性进行了初步评价。(4)制备载药胶束cRGD-CMCH-PA/PTX。以包封率和载药量为评价指标，筛选最佳药载比，并通过考察cRGD-CMCH-PA/PTX的粒径分布、Zeta电位®及胶束形态结构等对其质量进行评价；考察cRGD-CMCH-PA/PTX和Taxol在不同pH环境中的体外

6、释放情况。(5)以人源性非小细胞肺癌细胞Luc-A549为体外®细胞模型，采用MTT法考察的cRGD-CMCH-PA/PTX和Taxol细胞毒性；分别通过共聚焦显微镜、流式细胞仪及活细胞工作站定性、定量地考察Luc-A549细胞对荧光染料香豆素6(Coumarin6)标记cRGD-CMCH-PA/C6胶束的摄取情况；流式细胞仪考察PTX的不同剂型对细胞凋亡的影响。(6)建立生物自发光的皮下和原位肿瘤模型，通过生物发光检测肿瘤所在位置和生长情况；利用近红外小动物成像系统(IVIS)，分别考察载荧光染料

7、Dir胶束CMCH-PA/Dir和cRGD-CMCH-PA/Dir在接种皮下瘤和原位瘤的荷瘤小鼠体内的靶向性。(7)通过正电子发射断层显像/X线计算机体层成像仪(PET/CT)和生物发光综合考察cRGD-CMCH-PA/PTX的体内抗肿瘤药效学。1结果(1)红外光谱和H-NMR谱表征结果均表明cRGD-CMCH-PA的成功合成，PA和cRGD的接枝率分别为15.0%和37.5%。(2)芘荧光探针法测得-3cRGD-CMCH-PA在pH7.4条件下的CMC值为2.72×10mg/ml，而在pH5.3时

8、I-2的CMC值为1.40×10mg/ml；空白胶束cRGD-CMCH-PA在pH7.4时的粒径为(162.9±1.5)nm，Zeta电位为(-17.2±1.6)mV，呈负电性，而在pH5.3条件下的粒径出现多峰，Zeta电位明显上升，约为(5.4±1.2)mV；MTT试验和溶血性试验结果显示，所构建的胶束具有良好的安全性。(3)对cRGD-CMCH-PA/PTX制备处方进行初步筛选，得到载体cRGD-CMCH-PA和药物PTX最佳质量比为10:4(w/w)，最佳处方