cbd-bfgf对小鼠放射性肺损伤的作用及其机制研究

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1、__SOOCHOWUNIVERSITY立论文0Hi磁⑩M论文题目CBD-bFGl对小鼠放射性肺损伤的作用及其机制研究研究生姓名黄振指导教师姓名凌春华专业名称呼吸内科学研究方向放射性肺损伤论文提交日期2015年3月CBD-bFGF对小鼠放射性肺损伤的作用及其机制研究中文摘要I中文摘要CBD-bFGF对小鼠放射性肺损伤的作用及其机制研究IICBD-bFGF对小鼠放射性肺损伤的作用及其机制研究中文摘要CBD-bFGF对小鼠放射性肺损伤的作用及其机制研究中文摘要背景：放射性肺损伤（Radiation-inducedlunginjur

2、y，RILI）是胸部放疗后并发症，临床分为初期放射性肺炎和晚期放射性肺纤维化。近年来关于RILI的研究日益受到学者重视，因其发病机制未完全阐明，目前临床上仍缺乏特别有效的治疗方法。基于碱性成纤维细胞生长因子（basicFibroblastgrowthfactor，bFGF）具有血管再生、创伤修复、神经营养和神经再生等的生物学作用，目前重组bFGF已被广泛应用于创伤修复、糖尿病溃疡、脊髓损伤修复、帕金森综合征及阿兹海默病等临床治疗。[1][2]文献报道bFGF可以促进放射性损伤的修复，也可能对放射性肺损伤有积极促损[3]伤修复

3、的生物学作用。鉴于此，本课题采用人工修饰方法在bFGF肽链一端添加一个胶原蛋白结合域（collagenbindingdomain，CBD），构建重组CBD-bFGF，并对小鼠放射性肺损伤的早期进行干预，旨在探讨CBD-bFGF对小鼠放射性肺损伤的生物学作用。第一部分CBD-bFGF在体外的生物学活性及释放目的：比较胶原结合碱性成纤维细胞生长因子（collagenbindingdomain-basicFibroblastgrowthfactor，CBD-bFGF）和商品化碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）在生物学活性、胶原结合

4、率及缓释功能的等方面的差异。方法：采用CCK-8方法，检测CBD-bFGF促进人皮肤成纤维细胞（HS-865）的增殖作用，并且和商品化bFGF作对照。将相同浓度的CBD-bFGF溶液和bFGF溶液与大小相近的胶原支架耦合，6小时后将胶原支架从细胞因子溶液中取出，用BCA试剂盒（总蛋白定量测试盒）检测溶液中细胞因子的浓度，计算出CBD-bFGF和bFGF与胶原蛋白的结合效率；在体外不同时间点计算CBD-bFGF和bFGF从胶原里的释放量，绘制释放曲线。III中文摘要CBD-bFGF对小鼠放射性肺损伤的作用及其机制研究结果：在体

5、外，CBD-bFGF促进细胞增殖的生物学活性强于bFGF，与胶原支架的结合率高于bFGF。释放曲线表明，bFGF的释放速度高于CBD-bFGF，CBD-bFGF与胶原结合后具有明显的缓释效果。结论：CBD-bFGF可以高效地结合胶原蛋白，且具有明显的缓释功能，可发挥bFGF的促增殖作用。第二部分CBD-bFGF对小鼠放射性肺损伤早期的干预作用及其机制目的：探索CBD-bFGF对小鼠放射性肺损伤早期的干预作用，并探讨其可能的机制。方法：C57BL/6J雌性小鼠随机分为四组：空白对照组（A组，n=30只），辐射组（B组，n=50

6、只），辐射后第1天给予CBD-bFGF组（C组，n=60只），辐射后第7天给予CBD-bFGF组（D组，n=60只）。（1）小鼠放射性肺损伤模型的构建；A组小鼠作为空白对照，B、C和D三组小鼠全胸接受X线直线加速器辐射，单次，14Gy。（2）CBD-bFGF对放射性肺损伤小鼠的干预：C组小鼠于辐射后第1天、D组小鼠于辐射后第7天，分别气管内滴注CBD-bFGF（2ug/只）。所有小鼠于辐射后1周、2周、4周、8周、12周、16周、20周，观察并检测下列指标：①小鼠体重变化；②小鼠外貌变化；③肺组织切片HE和Masson染色；

7、④免疫组织化学染色法检测小鼠肺组织α-平滑肌肌动蛋白（α-smoothmuscleactin，α-SMA）、I型胶原蛋白（Collagen-I，Col-1）、III型胶原蛋白（Collagen-3，Col-3）、转化生长因子-β1（Transforminggrowthfactor-β1，TGF-β1）的表达。辐射后第20周时，取A、B、C和D四组各2只小鼠进行肺部CT平扫和三维重建。结果：A组小鼠行动自如，呼吸平稳，饮食饮水正常，全身毛发光泽鲜亮。B、C、D三组小鼠辐射后第3天开始出现精神萎靡，反应迟钝，呼吸频率较前升高，进

8、食进水量稍减少，在第2周时辐射野的毛发有少量变白；随着时间延长，小鼠辐射野毛发逐IVCBD-bFGF对小鼠放射性肺损伤的作用及其机制研究中文摘要渐变白脱落，但辐射部位皮肤无明显溃烂出血。A组小鼠体重持续增加。B、C、D三组小鼠在辐射后体重均下降，在8周后体重下降速度放缓并出现体重回升，但在