bafilomycin a1对钴纳米颗粒所致体内外不良生物学效应保护作用的实验研究

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1、SOOCHOWUNIVERSITY博士学位论文论文题目BaftlomydnAl对钴纳米颗粒所致体内外不良生物学效应保护作用的实验研究■..........研究生姓名王松华指导教师姓名文IJ墦专业名称骨外科学研究方向关节外科论文提交日期2015年3月本研究为国家自然科学基金课题：钴纳米粒子基因毒性与金属--金属人工全髋置换术后致瘤性的关系（课题编号：81171743）2苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它

2、教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：日期：2015-05-31苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社）、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文

3、的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文□本学位论文属在年月解密后适用本规定。非涉密论文☑论文作者签名：日期：2015-05-31导师签名：日期：2015-05-31BafilomycinA1对钴纳米颗粒所致体内外不良生物学效应保护作用的实验研究中文摘要BafilomycinA1对钴纳米颗粒所致体内外不良生物学效应保护作用的实验研究中文摘要第一部分BafilomycinA1抑制钴纳米颗粒诱导的小鼠巨噬细胞细胞毒性和促炎细胞因子的释放的实验研究[摘要]目的：研究BafilomycinA1对钴纳米颗粒（CoNPs）诱导的小鼠巨噬细胞细胞毒性和炎2+症反应的保护作用。方法：（

4、1）采用不同浓度的CoNPs、Co和BafilomycinA1对RAW264.7细胞进行甲基噻唑基四唑（Methylthiazolyltetrazolium，MTT）法检测细胞生存率；（2）通过对照组、CoNPs组、低剂量药物组、高剂量药物组四组MTT分析方法检测细胞生存率比较，评估BafilomycinA1对CoNPs细胞毒性的抑制作用；（3）采用DAPI对RAW264.7细胞核进行染色，荧光显微镜观察细胞数量的变化；（4）扫描电镜观察各组RAW264.7细胞超微形态学的变化；（5）2+采用ELISA法检测前炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达情况。结果：（1）Co

5、NPs及Co对RAW264.7细胞的细胞毒性效应呈现时间、浓度依赖性；BafilomycinA1（8nM，16nM）对RAW264.72+细胞没有细胞毒性；CoNPs和Co细胞毒性的起效浓度分别约为50、400µM；（2）随着BafilomycinA1作用浓度的增高RAW264.7细胞的细胞毒性逐渐减弱（P<0.05）；（3）荧光显微镜观察随着BafilomycinA1作用浓度的增高RAW264.7细胞数量逐渐增加；（4）扫描电镜观察显示CoNPs组的RAW264.7细胞伪足基本消失，且细胞明显缩小；随着BafilomycinA1作用浓度的增高RAW264.7细胞的伪足逐渐增多

6、，且细胞铺展面积逐渐与对照组接近；（5）随着BafilomycinA1作用浓度的增高炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6表达逐渐减弱（P<0.05）。结论：CoNPs对RAW264.7细胞2+的细胞毒性效应强于Co；BafilomycinA1（8nM，16nM）没有细胞毒性。BafilomycinA1对CoNPs所致RAW264.7细胞的细胞毒性和炎症反应具有保护作用。关键词：BafilomycinA1；CoNPs；RAW264.7细胞；细胞毒性；炎症因子第二部分BafilomycinA1抑制钴纳米颗粒诱导的小鼠巨噬细胞向破骨细胞分化的实验研究[摘要]目的：研究探索Bafi

7、lomycinA1对CoNPs诱导的RAW264.7细胞分化的影响。方法：（1）RAW264.7细胞培养第5d，通过倒置相差显微镜观察活体破骨细胞形态改变、TRAP染色、TRAP染色阳性细胞计数，从细胞形态学上来评估BafilomycinA1抑制CoNPs诱导巨噬细胞向破骨细胞I中文摘要BafilomycinA1对钴纳米颗粒所致体内外不良生物学效应保护作用的实验研究分化的作用；（2）培养第6d通过Real-timePCR检测破骨细胞基因表达从基因水平来评估BafilomycinA1抑制CoN