b-fgf在诱导上皮间质化过程中对notch1及hes1表达的影响

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1、分类号Ｒ５６３密级公开ＵＤＣ６１０编号１０５５５，义＠，義＃拿ｔ－：？．１硕ｄｒ学位论文（专业学位）ｂ－ＦＧＦ在诱导上皮间质化过程中对Ｎｏｔｃｈｌ及Ｈｅｓｌ表达的影而研究生姓名；刘倩指导教师、职称：何振华教授专业学位类别（领域）；临床医学（内科学）研究方向：肺纤维化所在学院；第二临床学院二０—五年五月义厳Ｉ糸＃著ｂ－ＦＧＦ在诱导上皮间席化过程中对Ｎｏｔｃｈｌ及Ｈｅｓｌ表的影响论文作者签名：指导教师签名：论支评阅人１：林科雄

2、，副教授，硕导，第Ｈ军民大坪跨院评阀人２一：郭述良戾協，教授，硕导，重庆戾科大学附评阅人３：答辩委员会主席：张巧亮，教授，硕导，南単大学附二睽院委员１：奉婷婷，丰化睽师，南华女学附二展院委员２一：刘蠢教授，，硕导，南坐大学附睽協委员３：曾高峰，教授，硕导，南坐大举附二睽院委员４：张秀峰，副教授，硕导，南坐大举附二民院委员５：委费６；答辩日期；少、ｒ年ＣＴ月，４日南华大学学位论文原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果

3、。尽我所知，除了论文中特别加标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。－作者签名■＞：么年月南华大学学位论文版权使用授权书本学位论文是本人在南华大学攻读（博／硕）±学位期间在导师指导下完成的学位论文。本论文的研究成果归南华大学所有，本论文的研究内容不得其它单位的名义发表。本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的

4、规定，目Ｐ；学校有权保留学位论文，允许学位论文被査阅和借阅；学校可Ｗ公布学位论文的全部＞或部分内容，可＾１采用复印、缩印或其它手段保留学位论文１学校可根据国家或；湖南省有关部口规定送交学位论文。同意学校将论文加入《中国优秀博硕±学位论文全文数据库》，并按《中国优秀博硕±学位论文全文数据库出版章程》规定享受相关权益＊同意授权中国科学信息技术研究所将本学位论文收录到《中国学，位论文全文数搪库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。对于涉密的学位论文，解密后适用该授极。扛作由者签名；月日＇导师签名：年

5、Ｓ月名６日b-FGF在诱导上皮间质化过程中对Notch1及Hes1表达的影响摘要：目的探讨Notch信号通路中相关信号分子在碱性成纤维细胞生长因子（basicfibroblastgrowthfactor,b-FGF）诱导肺泡上皮细胞A549间质转化过程中的表达情况，进一步明确b-FGF诱导上皮间质转分化的分子机制，为肺纤维化治疗提供新的靶点。方法体外常规培养A549细胞株，使其生长至对数期，应用无血清培养基同步化培养12h后，分成四组：A组即空白对照组；B组即b-FGF(10ng/ml)组：向细胞培养液中加入b-FGF，使其

6、终浓度为10ng/m1；C组即b-FGF+DAPT组：向细胞培养液中加入b-FGF，使其终浓度为10ng/m1同时加入DAPT（Notch信号通路抑制剂）使其终浓度为100nmol/m1；D组即DAPT组：正常培养的A549加入DAPT（Notch信号通路抑制剂）使其终浓度为100nmol/m1。以上各组细胞，均于48h后收集处理，用倒置显微镜观察细胞形态变化；用RT-PCR的方法检测细胞E-钙黏蛋白、α-平滑肌肌动蛋白(α-smoothmuscleactin,α-SMA)、Notch1、Hes1mRNA表达的水平，用Weste

7、rnblot的方法检测E-钙黏蛋白、α-SMA、Notch1、Hes1蛋白表达水平。I结果1、倒置显微镜下观察细胞形态变化正常对照组细胞A549呈现鹅卵石样紧密排列生长；经过b-FGF处理48h后的A549细胞呈梭形、纺锤形，细胞出现伪足，细胞排列较对照组松散，出现明显形态学改变；加入Notch信号通路抑制剂DAPT组（C组及D组）的细胞形态与正常对照组比较，细胞形态无明显改变。2、RT-PCR结果与A组比较，B组α-SMA、Notch1、Hes1mRNA表达增高，而E-钙黏蛋白mRNA表达降低，差异有统计学意义（P＜0.05）

8、；与B组比较，C组与D组α-SMA、Notch1、Hes1mRNA表达下降，而E-钙黏蛋白mRNA表达较高，差异有统计学意义（P＜0.05）。3、Westernblotting结果与A组比较，B组α-SMA、Notch1、Hes1蛋白表达较高，而E-钙黏蛋白表达