3种诱导剂对大鼠肝脏cyp2e1表达及肝损伤相关酶的影响

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1、摘要CYP2E1为CYP450酶家族中重要成员之一，其主要功能是代谢小分子化合物。CYP2E1的底物多为前毒物或前致癌物，经其代谢后可产生毒性效应，因此关于CYP2E1的研究在药物毒理学方面具有重要意义。咪唑、吡唑和对乙酰氨基酚是CYP2E1代谢底物中的不同类型小分子化合物，可影响CYP2E1的表达或酶的活性。本研究探讨咪唑、吡唑和对乙酰氨基酚在24h内对CYP2E1表达的调控以及对肝脏损伤的作用，为探索CYP2E1的毒性机制奠定理论基础。180只SD雄性大鼠随机分为三个批次进行咪唑、对乙酰氨基酚、吡唑对大鼠

2、的诱导实验。咪唑的60只大鼠分为空白对照组和低、中、高浓度药物组，每组15只，腹腔注射给药后，分别在1h、6h和24h每组随机选取5只大鼠，采血并分离肝脏，-80℃保存备用。对乙酰氨基酚和吡唑分组与咪唑相同。应用qRT-PCR测定大鼠肝脏CYP2E1mRNA的表达水平，WesternBlot法测定CYP2E1的蛋白表达量，紫外分光光度计法测定CYP2E1的酶活性，比色法测定血浆或肝脏中6种酶的变化。实验结果表明，3种药物对CYP2E1mRNA表达水平无显著影响（P>0.05）。与对照组比较，在1h和6h咪唑组

3、大鼠肝脏CYP2E1的蛋白表达量及酶活性无显著变化，24h则明显升高且呈现剂量依赖性；在1h、6h吡唑组大鼠肝脏CYP2E1的蛋白表达量及酶活性显著升高（P<0.05），24h下降并恢复正常；对乙酰氨基酚组的大鼠肝脏CYP2E1蛋白表达量则与给药剂量和给药时间呈剂量依赖性，而酶活性只在24h显著升高。3种药物都引起血浆中AST、ALT、ALP酶活性的升高，肝组织中GSH、SOD酶活性的降低以及MDA含量的升高。综上所述，在24h内，咪唑、吡唑和对乙酰氨基酚对CYP2E1的诱导作用主要是通过影响CYP2E1的蛋

4、白表达量及酶活性，而不是调节CYP2E1mRNA表达量。但各种药物对大鼠肝脏CYP2E1的蛋白表达量及酶活性的影响存在时间上的差异。咪唑及吡唑高剂量在24h引起大鼠肝脏轻度损伤，对乙酰氨基酚对肝脏损伤程度则呈现剂量时间依赖性。关键词：CYP2E1；咪唑；吡唑；对乙酰氨基酚；肝脏IAbstractThemainfunctionofCYP2E1isthemetabolismofsmall-molecularcompounds.TheresearchonCYP2E1hasimportantsignificancei

5、ndrugtoxicology，asmanysubstratesforCYP2E1arebeforethepoisonorprocarcinogenandcouldhaveatoxicologicaleffectsafterthemetabolizeofCYP2E1.Inthisstudy,imidazole,pyrazoleandacetaminophenaredifferenttypesofsmall-molecularcompoundofCYP2E1substrates,andcouldaffectth

6、eexpressionandenzyme'sactivityofCYP2E1accordingtoresearchreported.ThethreecompoundswereselectedtoinvestigatetheireffectontheregulationofCYP2E1expressionandliverinjurywithin24hoursinthisexperiment.180SDratswererandomlydividedintothreebatchesimidazole,acetami

7、nophen,pyrazolewereinducedinrats.Imidazole60ratsweredividedintocontrolgroupandlow,mediumandhighconcentrationofdruggroupsof15,afterintraperitonealinjection,respectively,in1h,6hand24h,5ratsineachgroupwererandomlyselected,bloodcollectionandseparationoftheliver

8、at-80℃storedforuse.acetaminophenandpyrazolearesameasimidazolegroups.TheexpressionlevelofCYP2E1mRNAinliverofratsweredeterminedbyqRT-PCR.TheexpressionlevelofCYP2E1proteinwasdeterminedbyWesternBlotmethod.