高温胁迫对西花蓟马抗氧化酶活性的影响及cat基因的克隆与表达

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2、：陈学新教授（浙江大学）．：ｒ＿＿三；ｒ＊气Ｘ也－冷巧衣巧占心喪兔杳’衫话心巧？，’公将－、讀為痴巧、等如：ｒ＾證纖！ＥＦＦＥＣＴＯＦＴＨＥＨＩＧＨＴＥＭＰＥＲＡＴＵＲＥＳＴＲＥＳＳＯＮＡＮＴＩＯＸＩＤＡＮＴＥＮＺＹＭＥＡＣＴＩＶＩＴＹＡＮＤＣＬＯＮＩＮＧＡＮＤＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮＯＦＣＡＴＧＥＮＥＯＦＦＲＡＮＫＬＩＮＩＥＬＬＡＯＣＣＩＤＥＮＴＡＬＩＳＢＹＺＨＥＮＧ－ＴＡＯＹＵＡＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮＳＵＢＭＩＴＴＥＤＩＮＰＡＲＴＩＡＬＦＵＬＦＩＬＬ

3、ＭＥＮＴＯＦＴＨＥＲＥＱＵＩＲＥＭＥＮＴＳＦＯＲＴＨＥＤＥＧＲＥＥＯＦＭＡＳＴＥＲＷＩＴＨＭＡＪＯＲＩＮＥＮＴＯＭＯＬＯＧＹＡＤＶＩＳＯＲ－：ＰＲＯＦＥＳＳＯＲＰＨ．ＤＤＵＹＵＺＨＯＵ（）ＹＡＮＧＺＨＯＵＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＹＡＮＧＺＨＯＵＪＩＡＮＧＳＵＣＨＩＮＡ，，ＭＡＹ２０１５，本研究得到农业部公益性行业专项：２０１１０３０２６，２００８０３０２５（编号）的资助。ｍｄｅｄ－ＴｈｉｓｒｅｓｅａｒｃｈｗａｓｆｌｂｙｔｈｅＳｐｅｃｉａｌＦｕｎｄｆｏｒＡｇ

4、ｒｏＳｃｉｅｎｔｉ贷ＣＲｅｓｅａｒｃｈｉｎｔｈｅＰｕｂｌｉｃＩｎｔｅｒｅｓｔＮＯ．２０１１０３０２６２００８０３０２５．（，）Ｉ中文摘要西花莉马是为害园艺作物和经济作物的世界性害虫。该虫于２００３年首次在北京发现，之后迅速蔓延至我国的大部分地区，为害日益严重。西花勸马在入侵过程中，常常遭受夏季高温胁迫，但这并未能限制其种群的快速扩张。本文采用生理生化和分子生物学的方法，分析抗氧化酶系统在高温胁迫条件下的作用，Ｗ了解西花鉤马对高温胁迫的耐受机制，为西花葫马种群扩散研究提供理论依据。主要研究结果如下

5、：１．研究了高温胁迫对西花萄马抗氧化酶活性的影响。结果表明，西花割马受到化５、１、和２ｈ的高温胁后，超氧化物歧化酶过氧化物酶和过氧化氨酶的活性显著升高而后降低；－Ｓ－转移酶的活性则在化化高温处理条件下显著升高谷脫甘肤，而在１和２ｈ高温胁迫下活性变化不显著。说明西花莉马抗氧化酶系统能够有效抵御高温胁迫对其造成的氧化损伤。－－２．通过ＲＴＰＣＲ技术克隆了７个西花葫马内参基因的部分片段，包括１８ＳｒＲＮＡ、ＥＦｌ、ＧＡＰＤＨ－、Ｈ３、ＴＵＢ、ＡＣＴ和ＲＰＵ２。利用ｑＲＴＰＣＴ技术研究了西花药马７个内参基因在（ｒｍｅｒ

6、、ｅｒｍ不同实验条件下的稳定性，运用常用的内参基因筛选程序ＮｏＦｉｎｄｇＮｏ和ＢｅｓｔＫｅｅｐｅｒ）Ｗ及比较ＡＣｔ法对各内参基因进行了排名，最后使用民ｅｆＦｉｎｄｅｒ网页程序进行－综合评估：１，得出最佳的内参基因方案。最合适的内参基因组合如下不同发育阶段为ＥＦ３２高温胁迫为ＲＰＬ３２和ＧＡＰＤＨ低温胁迫为－温时间梯度为ＴＵＢ和ＲＰＬ；；１８Ｓ和ＥＦ１；高－和ＧＡＰＤＨ１和ＴＵＢ。最后，对筛选的内参基因进行验证，表明内参；低温时间梯度为ＥＦ基因的筛选对目的基因定量研究标准化非常必须。３－．采用ＲＴＰＣＲ和ＲＡＣＥ的方

7、法从西花药马中克隆得到过氧化氨酶基因，命名为ＦｏＣＡＴ。ＦｏＣＡＴ的ｃＤＮＡ全长为１８７０ｂｐ，开放阅读框为１５２化Ｐ，编码５０６个氨基酸，预测分子量为５７．Ｈｋｄａ。序列分析表明，ＦｏＣＡＴ十分保守，与其他昆虫的ＣＡＴ具有很高的相似性一，ＦｏＣＡＴ具有两个ＣＡＴ家族的签名序列，这也表明ＦｏＣＡＴ属于ＣＡＴ基因家族的员。采用实时定量ＰＣＲ研究了西花到马过氧化氨酶基因在不同发育历期和不同温度条件下的表达模式。结果表明高温胁迫能诱导ＣＡＴ的表达，而低温胁迫对ＣＡＴ表达的影响不显著；ＣＡＴ在西花萄马二龄若虫阶段表达量显著高

8、于其它龄期的表达量；不论是高温还是低温不同时间梯度处理均导致ＣＡＴ表达量显著上调，且在处理２ｈ达到最高值。综上所述，西花茹马能够耐受较强的离温胁迫是其迅速入侵扩散的重要基