饱和富氢液对糖尿病神经病变的保护作用及机制研究

《饱和富氢液对糖尿病神经病变的保护作用及机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：R614学校代码：10062密级：学号：2012601119博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：饱和富氢液对糖尿病神经病变的保护作用及机制研究TITLE:ProtectiveEffectsandtheMechanismsofsaturatedHydrogenrichsalineondiabeticneuropathy一级学科：临床医学二级学科：麻醉学论文作者：李波指导教师：于泳浩天津医科大学研究生院二〇一五年五月分类号：R614学校代码：10062密级：学号：2012601119学位

2、类别：科学学位专业学位学科门类：医学博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：饱和富氢液对糖尿病神经病变的保护作用及机制研究TITLE:ProtectiveEffectsandtheMechanismsofsaturatedhydrogenrichsalineondiabeticneuropathy一级学科：外科学二级学科：麻醉学论文作者：李波指导教师：于泳浩教授导师组成员：王国林教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究

3、工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：2015年5月5日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密

4、后适用本授权书。本论文属于不保密√。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期2015年5月25日导师签名：日期2015年5月25日天津医科大学博士学位论文中文摘要富氢液对糖尿病神经病变的影响及相关机制研究糖尿病神经病变是糖尿病常见的慢性并发症之一。大量研究表明，氧化应激反应、炎症因子释放以及细胞的凋亡在糖尿病神经病变中起重要作用。目前，对于糖尿病神经病变尚无有效的防治措施!近年众多研究表明，低浓度氢分子(<4％)及富氢液具有选择性抗氧化、抗炎、抗凋亡作用，并已证明可应用于多种疾病动物模型的治疗，如：脏器的

5、缺血/再灌注损伤、神经退行病变、脓毒血症等。因此，越来越多的学者认为氢气与富氢液是一种新型的医学气体分子。本课题利用离体高糖培养的雪旺细胞(RSC96)和在体糖尿病大鼠模型，探讨富氢液对糖尿病神经病变保护作用的可能机制，为临床治疗奠定基础。实验一、富氢液对高糖诱导雪旺细胞损伤的影响目的：高血糖诱发的氧化应激、炎症反应以及导致的雪旺细胞的凋亡在糖尿病神经病变的病理生理过程中具有重要意义。富氢液具有选择性抗氧化、抗炎、抗凋亡作用。本实验拟利用高糖培养下的雪旺细胞(RSC96)，探讨富氢液对于高糖培养的雪旺细胞影响。方法：

6、大鼠永生化雪旺细胞株(RSC96细胞)培养于含10%胎牛血清的DMEM培养基，接种于6孔或96孔细胞培养板，3mL/孔或200μL/孔，细胞密度2×l06/mL。第一部分：不同浓度高糖诱导下对雪旺细胞的影响，体外培养的雪旺细胞分为5组(n=30)：正常对照组(5.6mmol/L)和高糖组(25mmol/L、50mmol/L、100mmol/L)、甘露醇组，分别于培养24h、48h、72h应用MTT(四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法)法检测高糖对RSC96细胞增殖的影响；同时应用酶联免疫法检测炎症细胞因子(IL-1β，H

7、MGBl)、氧化应激产物(MDA、8-羟基脱氧鸟苷)变化情况。第二部分：富氢培养液对高糖培养的雪旺细胞影响。1.体外培养的RSC96雪旺细胞接种于培养皿培养48h，采用随机数字表法将细胞分为6组(n=6)：正常对照(Con)组、高糖(HG)组(根据第一部分实验结果，50mmol/L高糖组入选)、富氢水(HS)组、HG+HS(0.15/0.30/0.60mmol/L)组，细胞I天津医科大学博士学位论文培养采用正常培养液与不同浓度的含氢培养液培养，给予或不给予高糖处理，48h后收集细胞培养液，应用MTT法检测各组细胞增殖

8、情况。2.探讨饱和富氢培养液对于高糖所致雪旺细胞氧化应激、炎症反应以及凋亡的作用。实验分为三组(n=6)：正常对照(Con)组、高糖(HG)组、HG+HS(根据第二部分实验，0.60mmol/L组入选)。对照组培养基含糖5.6mmol/L，HG组含糖50mmol/L，HG+HS组为含有0.6mmol/L氢分子的高糖培养基。48h末，进行超氧化物