长白山牛皮杜鹃抗逆机理及耐寒microrna393的初步研究

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4、ｉ２０１５６年月吉林师范大学硕士学位论文摘要长白山牛皮杜鹃(RhododendronchrysanthumPall)长期生长在长白山海拔1689~2401米的高山岳桦林带至高山冻原带上，年平均气温在-7℃至3℃之间，在这种极端环境条件下，逐渐形成了可以抵御逆境胁迫的形态结构和遗传生理生化机制。本文对长白山牛皮杜鹃（简称牛皮杜鹃）解剖结构、生理生化指标及耐寒microRNA393抗逆机制进行研究，为牛皮杜鹃抗逆机理研究提供理论基础。1、牛皮杜鹃的解剖结构研究：对牛皮杜鹃的叶片和茎进行横切，对其解剖结构进

5、行比较，结果显示，牛皮杜鹃叶主脉维管束较组培苗发达，疏导能力强。牛皮杜鹃栅栏组织层数较多，海绵组织和胞间隙不发达。组培苗表皮细胞排列疏松，细胞较大。牛皮杜鹃维管柱中髓射线比组培苗发达，且排列紧密。2、牛皮杜鹃的生理生化指标测定研究：对牛皮杜鹃叶片的叶绿素含量和叶绿素相对含量（SPAD值）进行测定，结果显示，牛皮杜鹃叶绿素含量及SPAD值均高于组培苗，这与牛皮杜鹃长期高光照，光合速率正相关。对牛皮杜鹃的蛋白质含量进行测定，结果显示，牛皮杜鹃蛋白质含量高于组培苗，其生长环境恶劣，为了抵御逆境会积累大量蛋白质。对牛

6、皮杜鹃叶片超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、过氧化物酶（POD）和过氧化氢酶（CAT）活性进行了测定，结果显示，牛皮杜鹃的SOD、POD和CAT的活力高于组培苗，MDA则相反，MDA活力反应膜脂过氧化能力，而SOD则反应植物体清除自由基的能力，POD、CAT与SOD有协同作用，清除系统中的活性氧，由此得出牛皮杜鹃抗逆性较强。对牛皮杜鹃的糖含量测定，结果显示，牛皮杜鹃的总糖百分含量高于组培苗，差异性显著。3、牛皮杜鹃的RNA提取方法优化研究：牛皮杜鹃生长环境特殊，其体内次生代谢物种类及含量也远高于其他

7、物种，多糖多酚类物质大量积累，利用CTAB法、Trizol+CTAB法等均无法提取到高质量RNA。最后利用RNAiso+CTAB法提取牛皮杜鹃RNA，将多糖多酚对实验的影响降到最低，操作简便快捷，获得的RNA完整、无DNA污染，可以满足后续的分子水平研究。4、牛皮杜鹃中耐寒miR393基因表达分析：miR393基因仅21nt，普通引物无法对其进行反转录，设计特异颈环引物，对其反转录，再通过半定量RT-PCR对牛皮杜鹃miR393基因进行表达分析，结构显示受到寒冷胁迫后miR393基因表达量升高，这初步证明mi

8、R393基因与牛皮杜鹃寒冷胁迫应答相关。II吉林师范大学硕士学位论文关键词：长白山牛皮杜鹃；机理；生理生化指标；抗逆性；microRNAIII吉林师范大学硕士学位论文AbstractRhododendronchrysanthumPalllong-termgrowthinchangbaimountainof1689~2401metersabovesealevelErman'sBirchforestzo