血吸虫感染鼠树突状细胞抑制过敏性哮喘的机制

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1、分类号：R383学校代码：10062密级：学号：2012601008博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：血吸虫感染鼠树突状细胞抑制过敏性哮喘的机制TITLEThemechanismoftheSchistosomaJaponicuminfecteddendriticcellsinhibitallergicreaction一级学科：基础医学二级学科：病原生物学论文作者：路平指导教师：刘佩梅天津医科大学研究生院二〇一五年五月分类号：R383学校代码：10062密级：学号：2012601008学位类别：科学学位专业学位学科门类：医学博士学

2、位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：血吸虫感染鼠树突状细胞抑制过敏性哮喘的机制TITLEThemechanismoftheSchistosomaJaponicuminfecteddendriticcellsinhibitallergicreaction一级学科：基础医学二级学科：病原生物学论文作者：路平指导教师：刘佩梅导师组成员：胡立志天津医科大学研究生院二〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已

3、经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：2015年5月30日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密√。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：2015年5月30日导师签名：日期：2015年5月

4、30日天津医科大学博士学位论文中文摘要目的研究日本血吸虫（SJ）感染鼠树突状细胞（DC）在抑制过敏性哮喘中的作用机制。方法第一部分，利用过继转移实验研究SJ感染鼠DC亚型在抑制过敏性哮喘疾病中的作用，我们用CD8α+磁珠和CD11c+磁珠分离纯化SJ感染鼠、SEA致敏鼠及正常鼠DC亚群CD8α+CD11c+及CD8α-CD11c+细胞，一部分用于qRT-PCR检测各DC亚型分泌细胞因子的表达，另一部分通过尾静脉过继转移给正常小鼠（5×105DC/只），1h后诱发哮喘。4周后取小鼠肺组织作病理切片，观察其炎症变化。收集小鼠脾细胞培养的上清液、肺泡灌洗液、血清，用

5、于检测细胞因子IL-4、IL-5、IL-10、IL-12、TGF-β及OVA特异性IgE水平；第二部分，探讨SEA刺激后DC在诱导CD4+T分化方向改变中的作用。我们在体外培养骨髓DC，并用可溶性虫卵抗原（SEA）刺激18h，以LPS刺激作为阳性对照，以Medium刺激作为阴性对照。流式细胞术（FACS）、免疫组化和qRT-PCR检测刺激后DC表面标志和分泌细胞因子的变化。将刺激后的DC与OVA诱导哮喘小鼠脾脏中的CD4+T共培养48h、72h后用qRT-PCR的方法检测CD4+T分泌细胞因子的变化；第三部分，从支气管粘液分泌的角度探讨SJ感染小鼠抑制过敏性哮

6、喘的机制。我们用SJ感染小鼠以及过继转移SEA致敏鼠DC亚型并诱发哮喘后取小鼠肺脏做HE和PAS染色并检测肺部MUC5ACmRNA表达情况，观察炎症和黏液分泌的变化。利用qRT-PCR检测肺部IL-13mRNA表达的变化，用IHC观察小鼠肺部IL-13和CD4+T的表达位置。体外培养骨髓DC并用SEA刺激后qRT-PCR检测IL-13mRNA的变化，将DC与CD4+T共培养48h和72h分别后用qRT-PCR检测CD4+T表达IL-13mRNA的变化。结果第一部分，qRT-PCR法检测显示CD8α-DC与CD8α+DC相比无论是感染组还是正常组CD11bmRN

7、A水平均明显降低（P＜0.05），SJCD8α-DC组的CD80mRNA、CD86mRNA水平相对于SJCD8α+DC明显下降（P＜0.05），而IL-10mRNA水平明显升高（P＜0.05），TGF-βmRNA（P＜0.001）和IL-12mRNA表达降低（P＜0.05）。肺部病理学结果显示过继转移SJ/SEA小鼠CD8α-DC与其他组相比炎症明显减轻（P＜0.05）。ELISA检测血清中OVA特异性IgE结果显示过继转移SJ/SEA小鼠CD8α-DC组与其他组相比明显下降（P＜0.05），检测过继转移SJ/SEA小鼠CD8α-DC组的BALF和脾细胞培养上

8、清液中IL-4、IL-5水平明显升高（