腺病毒介导的her2-sirna联合顺铂对人卵巢癌移植瘤的治疗效应及spect显像监测研究

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1、SOOCHOWUNIVERSITY硕士学位论论文题目腺病毒介导的HER2-siRNA联合顺铂移植瘤的治疗效应及SPECT显像毛鑫萍指导教师姓名石怡珍专业名称__________影像医学与核医学论文提交日期2015年3月苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其他教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个体和集体，均已在文中以明确方式

2、标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：龙余I日期:学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学◊本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容一致◊苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社）、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文□本学

3、位论文属在______年_月解密后适用本规定。非涉密论文□论文作者签名:日期:导师签名：日期:腺病毒介导的HER2-siRNA联合顺铂对人卵巢癌移植瘤的治疗效应及SPECT显像监测研究中文摘要腺病毒介导的HER2-siRNA联合顺铂对人卵巢癌移植瘤的治疗效应及SPECT显像监测研究中文摘要目的：构建针对Her2/neu的RNA干扰腺病毒载体包装重组腺病毒，观察重组腺病毒感染移植瘤并联合化疗药物顺铂对人卵巢癌移植瘤的治疗作用，并用131I-Herceptin作显像剂，SPECT显像活体监测腺病毒介导的HER2-siRN

4、A对移植瘤内HER2表达的干扰效应，为进一步研究卵巢癌的基因治疗奠定实验基础。方法：①根据本实验室前期研究已经筛选出干扰效率满意的HER-2/neu-shRNA序列，构建及鉴定特异性的HER2-siRNA腺病毒载体及一条随机序列的阴性对照腺病毒载体。②将上述载体经Lipofectamine2000转染到HEK293细胞中，采用AdMax腺病毒包装系统进行腺病毒的包装，并通过Adeno-X™VirusPurificationKit方法纯化腺病毒，运用终点稀释法测定腺病毒滴度。③卵巢癌SKOV-3细胞接种BALB/c裸鼠

5、后随机分组进行治疗实验：瘤内及瘤周注射特异性的HER2-siRNA腺病毒（Ad-HER2-RNAi组）、阴性腺病毒（NC组）及PBS（CON组），检测各组瘤体大小、瘤体重量、免疫组化测定各组HER2蛋白表达，利用131I-曲妥珠单克隆抗体（Herceptin）分别对荷卵巢癌移植瘤裸鼠进行SPECT放射免疫显像，研究裸鼠间隔15天的两次重复显像、不同剂量的131I-Herceptin显像变化及计算各实验组肿瘤/本底（T/B）比值。④荷卵巢癌移植瘤裸鼠随机分五组进行联合治疗实验：特异性的HER2-siRNA腺病毒和顺铂（

6、Ad-HER2-RNAi+DDP组）、特异性的HER2-siRNA腺病毒和生理盐水（Ad-HER2-RNAi组）、PBS和顺铂（DDP组）、阴性腺病毒和生理盐水（NC组）、PBS和生理盐水（CON组），每组的DDP和生理盐水是腹腔注射给药，其余为瘤内及瘤周注射。检测各组裸鼠体重、瘤体大小、瘤体重量、免疫组化测定各组HER2蛋白表达，利用131I-Herceptin对每组裸鼠进行SPECT放射免疫显像，分析图像变化，计算各组肿瘤/本底（T/B）比值。结果：①成功构建HER2-siRNA干扰序列及随机序列的腺病毒穿梭质粒

7、，测序证实序列正确。②重组腺病毒成功包装，获得了高滴度1×1011PFU/mL的腺病毒。I中文摘要腺病毒介导的HER2-siRNA联合顺铂对人卵巢癌移植瘤的治疗效应及SPECT显像监测研究③Ad-HER2-RNAi组移植瘤与CON组和NC组相比，平均瘤体积、瘤体重量均明显减小（P＜0.05）；免疫组化结果亦证实Ad-HER2-RNAi组HER2蛋白的表达明显下调；各组裸鼠经尾静脉注射131I-Herceptin后1h即可见移植瘤部位显影，瘤体影像随时间延长显影逐渐清晰，间隔15d裸鼠重复显像无明显差异，不同剂量显像剂

8、对图像无明显影像，因而后续实验选择中等剂量7.4MBq的131I-Herceptin作为每次显像用量；比较各时间点T/B值及经组织厚度校正后的T/B值，Ad-HER2-RNAi组与CON组和NC组比较，差异均具有统计学意义（P＜0.01）。④联合治疗实验结果显示：与CON组和NC组比较，Ad-HER2-RNAi组和DDP组和Ad-HER2-RN