BACH1与BTF相互作用对DNA损伤修复的影响

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1、学校代码：10270分类号：Q28学号：152200869硕士学位论文BACH1与BTF相互作用对DNA损伤修复的影响学院：生命与环境科学学院专业：细胞生物学研究方向：DNA损伤修复研究生姓名：丁媛媛指导教师：张峰教授完成日期:2018年4月1日上海师范大学硕士学位论文摘要摘要乳腺癌已经成为全球女性发病率最高的恶性肿瘤，并且发病率及死亡率仍呈逐年上升的趋势。在我国，恶性肿瘤不仅已成为严重的公共卫生问题，也是影响人民生活质量和制约我国经济发展的重要社会问题。阐明恶性肿瘤发生发展及复发转移的分子机制是抗肿瘤药物研发的关键。BACH1（BRCA1associatedC-terminalhelicas

2、e，或BRIP1/FANCJ）编码的蛋白是属于RecQDEAH解旋酶家族的蛋白质。BACH1的突变主要与乳腺癌（BreastCancer，BC）、卵巢癌、范可尼贫血症的发生发展有关。BACH1与BRCA1的C末端BRCT结构域相互作用，在BRCT结构域与CtIP、Abraxas/RAP80形成复合物共同参与到DNA损伤修复和抑制肿瘤形成的过程中。DNA损伤修复系统在维持基因组稳定性和抑制肿瘤发生中具有非常重要的作用，DNA损伤修复相关基因的突变或异常表达常导致肿瘤的发生。BACH1是DNA损伤应答过程中的一个重要的调节因子，在调节DNA复制应激反应、同源重组修复及交联修复中发挥重要作用，BAC

3、H1的突变会影响细胞内DNA损伤修复功能，导致肿瘤的发生。首先，我们通过亲和纯化，质谱鉴定和免疫共沉淀等方法，发现BTF是BACH1的一个新的相互作用蛋白。进一步分析发现，两者之间的相互作用依赖于BACH1的D9(a.a.852-976)和BTF的D7，缺失了BACH1的D9片段或者BTF的D7片段都能破坏两者之间的相互作用。DNA损伤诱导BACH1、BTF的表达量增高，同时也增强二者的相互作用。诱导DNA损伤后，通过免疫荧光实验发现BACH1、BTF及γH2AX都能在相同DNA损伤位点形成Foci，这表明BACH1与BTF共定位参与DNA损伤修复。接下来，我们用激光辐照诱导活细胞DNA损伤，

4、成像的实验结果显示，BACH1缺失了与BTF相互作用的D9结构域不影响其在DNA损伤位点的募集，而BTF缺失了与BACH1相互作用的D7结构域则会影响它参与DNA损伤修复的过程，表明在DNA损伤修复通路中，BACH1蛋白位于BTF蛋白的上游。我们用siRNA分别敲低HEK293T细胞内BACH1或BTF的表达后再用激光诱导活细胞DNA损伤，成像结果显示敲低BACH1影响BTF在损伤位点的募集，而敲低BTF不影响BACH1于DNA损伤位点的募集，这表明在DNA损伤修复通路中BACH1是BTF的上游蛋白。此外，我们还研究了BACH1蛋白与BTF蛋白对细胞增殖的影响，发现无论敲低BACH1还是敲低B

5、TF都会对细胞增殖产生负影响，两种蛋白同时被敲低对细胞增殖的负影响更为明显，表明这两种蛋白在细胞增殖中也有重要作用。I摘要上海师范大学硕士学位论文关键词：恶性肿瘤；DNA损伤应答；BACH1；BTF；细胞增殖IIShanghaiNormalUniversityMasterofPhilosophyAbstractAbstractBreastcancerhasbecomethehighestincidenceofmalignanttumorsintheworldwithincreasedmorbidityandmortalityrate.InChina,malignanttumorhasnoton

6、lybeenathreattopublichealth,butalsoaserioussocialproblemaffectingthequalityofpeople'slivesandrestrictingtheeconomicdevelopment.Therefore,understandingtheunderlyingmechanismoftumorigenesis,development,recurreceandmetastasisisthekeytodevelopnewanti-tumordrugs.BACH1（BRIP1，FANCJ）encodesaproteinbelonging

7、totheRecQDEAHhelicasefamily.AberrationsinBACH1havebeenmainlyassociatedwiththeoccurrenceanddevelopmentofbreastcancer(BC),ovariancancer,andtypeJFanconianemia.ItinteractswiththeC-terminalBRCTdomainofBRCA