Filia和Floped对卵细胞DNA损伤修复的影响

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1、扉页：独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人或集体已经发表或撰写过的研究成果，对本文的研究做出贡献的集体和个人均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：剖良态、暨日期：h坚涓∑615l研究生签名：6k念、竺日期：矽鳖>芦山D腿论文使用和授权说明本人完全了解云南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文和论文电子版；允许论文被查阅或借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其

2、他复制手段保存论文。(保密的论文在解密后应遵循此规定)研究生签名：蜂导师签名：障本人及导师同意将学位论文提交至清华大学“中国学术期刊(光盘版)电子杂志社”进行电子和网络出版，并编入CNKI系列数据库，传播本学位论文的全部或部分内容，同意按《中国优秀博硕士学位论文全文数据库出版章程》规定享受相关权益。研究生签名：——导师签名：——日期：云南大学硕士学位论文摘要哺乳动物卵和早期胚胎发育受到母源基因的调控。其中Filia和Floped是两个重要的母源基因，它们是小鼠卵皮层下母源性蛋白质复合体的重要组分，对小鼠早期胚胎发育调控非常重要。Filia

3、基因缺失会导致小鼠着床前胚胎发育延缓，有丝分裂纺锤体异常及染色体非整倍性突变。而Floped基因缺失会导致胚胎出现不均一卵裂，胚胎发育停滞在2细胞阶段，但其作用及机制并不清楚。在卵和早期胚胎发育过程中，DNA会受到内源和外源因素的影响，导致DNA出现损伤，卵细胞需要负责对自身和精子的DNA损伤进行修复，否则会将损伤传递给后代，导致后代出现功能异常或突变。而母源基因对DNA损伤修复功能是否具有调控作用目前仍知之甚少。本工作利用Filia和Floped基因敲除小鼠，采用Etoposide处理建立GV卵DNA双链断裂模型，通过免疫荧光染色技术来

4、检测DNA损伤修复相关蛋白(p．ATM、53BPl、Rad51、DNA-PKcs)的表达情况，研究Filia和Floped母源蛋白在卵细胞DNA损伤修复中的作用。发现Filia和Floped基因的缺失会导致GV卵中DNA损伤的积累，GVBD发生时间延迟，发生比率降低，DNA损伤的修复能力下降，表明这两个基因的缺失导致DNA损伤修复功能受到影响。进一步研究发现，Filia基因缺失对DNA损伤同源重组(homologousrecombination，HR)修复相关蛋白(53BPl、Rad51)及损伤信号传导因子p-ATM和非同源末端链接(no

5、n-homologousendjoining，NHEJ)修复参与蛋白(DNA．PKcs)的表达没有显著的影响。而Floped基因缺失导致HR修复的p．ATM和Rad51的表达明显降低，而对NHEJ修复的DNA．PKcs的表达没有影响。上述研究显示，Filia和Floped基因的缺失都会影响DNA损伤的修复功能，其中Floped是通过调控p-ATM和Rad51的功能来调节HR修复的，而Filia基因是如何影响修复功能还需要进一步研究。我们的研究结果首次发现母源蛋白Filia和Floped参与调控卵细胞DNA损伤修复，进一步扩展了我们对母源基

6、因的功能认识。关键词：母源基因、DNA损伤、HR修复、NHEJ修复云南大学硕士学位论文AbstractMammalianoocyteandearlyembryonicdevelopmentisregulatedbymaternalgenes，FiliaandFlopedaretwomatemalgenes，theyareimportantcomponentsofSCMC，regulatemouseoocyteandearlyembryonicdevelopment．ThedepletionofFiliaimpairspreimplanta

7、tionembryodevelopmentwithahighincidenceofaneuploidythatresultsfromabnormalspindleassembly，chromosomemisalignment，andspindleassemblycheckpoint(SAC)inactivation．WhilethefemalemicelackofFlopedisinfertility，theblastomereswereoftenunequalinsizeanddegeneratein2-cellembryostage，

8、butitsroleandmechanismisnotclear．ManyfactorsmayresultinDNAdamageinoocytesandembryos，Oocyterespon