BTF与BACH1相互作用共同参与DNA损伤修复

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1、学校代码：10270分类号：Q28学号：152200870硕士学位论文BTF与BACH1相互作用共同参与DNA损伤修复学院：生命与环境科学学院专业：细胞生物学研究方向：DNA损伤修复研究生姓名：董长江指导教师：张峰教授完成日期：2018.04.03上海师范大学硕士学位论文摘要摘要BTF(Bcl2associatedtranscriptionfactor1,BTF或BCLAF1)最初被鉴定为一种与BCL2家族的抗凋亡成员相互作用的蛋白质。初步研究表明，该蛋白质具有细胞凋亡诱导因子和转录抑制因子的作用。随后的研究表明，BTF在广泛的生理过程中起关键作用，但这些生理

2、过程通常并不与BCL2家族成员的作用相关，比如肺发育，T细胞活化和卡波西肉瘤相关疱疹病毒的溶解感染程序的控制。近些年的研究还表明BTF在影响mRNA代谢的转录后过程中发挥作用。已知BACH1（BRCA1associatedC-terminal,BACH1）参与到范可尼贫血信号通路以及同源重组修复（HomologousRepair,HR），而同源重组修复中核心蛋白之一是BRCA1（Breastcancer1,earlyonset,BRCA1），BRCA1可以与BACH1相互作用共同参与同源重组修复。我们最初的研究发现纯化BACH1的互作蛋白中存在BTF，显示两者

3、可能存在相互作用，而先前的报道并未涉及两者存在于共同的信号通路。为了明确BTF和BACH1相互作用的关键区域，我们构建了SFB-BTF和GFP-BACH1的野生型和一系列缺失突变体质粒，通过瞬时转染U2OS细胞以及CoIP明确了BTF的近C端的（a.a.625-716）是BTF和BACH1相互作用的关键区域，并进一步通过体外表达GST融合蛋白利用GSTpull-down的方法证实了这一相互作用的关键区域，这为阐明BTF以何种方式参与DNA损伤修复提供了重要信息。为了进一步探索BTF在DNA损伤修复通路的重要作用，我们检察了BTF在诱导DNA损伤后的细胞定位。在

4、野生型细胞中BTF和BACH1会被迅速募集到损伤位点，进一步的研究发现当用siRNA敲低BACH1后，BTF在DNA受到严重的损伤后不能再被募集到损伤位点，并且在BRCA1缺失细胞株HCC1937中BTF和BACH1在受到DNA损伤后都不能被募集到损伤位点。因而我们初步得出BRCA1、BACH1、BTF三者依次在DNA损伤修复反应中发挥重要的调节作用。关键词：BTF；DNA损伤应答；凋亡；蛋白相互作用ⅠAbstractShanghaiNormalUniversityMasterofPhilosophyAbstractBTF(Bcl2associatedtran

5、scriptionfactor1,BTForBCALF1)wasoriginallyidentifiedasaproteinthatinteractswithanti-apoptoticmembersoftheBCL2family.Preliminarystudieshaveshownthatthisproteinactsasanapoptosis-inducingfactorandatranscriptionalrepressor.SubsequentstudieshaveshownthatBTFplaysakeyroleinawiderangeofproc

6、essesthatarenotnormallyassociatedwiththeroleofBCL2familymembers,includinglungdevelopment,Tcellactivation,andthecontroloflyticinfectionprogramsofKaposisarcoma-associatedherpesviruses.RecentstudiesindicatethatBTFplaysaroleinthepost-transcriptionalprocessthataffectsmRNAmetabolism.BACH1

7、(BRCA1interactingproteinC-terminalhelicase1)isknowntobeinvolvedintheFanconianemiasignalingpathwayandhomologousrecombinationrepair(HR).BRCA1(Breastcancer1,earlyonset,BRCA1)isthecoreproteinofHR.BRCA1caninteractswithBACH1thenparticipatesinhomologousrecombinationrepair.Ourinitialstudyfo

8、undthatBTFwaspresen