红松松仁降脂肽的分离及其对脂质代谢的影响

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1、硕士学位论文红松松仁降脂肽的分离及其对脂质代谢的影响THESEPARATIONANDEFFECTSONLIPIDMETABOLISMOFHYPOLIPIDEMICPEPTIDESFROMPINUSKORAIENSISPINENUTS邵素娟哈尔滨工业大学2018年6月国内图书分类号：Q946.1学校代码：10213国际图书分类号：619.密级：公开工学硕士学位论文红松松仁降脂肽的分离及其对脂质代谢的影响硕士研究生：邵素娟导师：王振宇教授申请学位级别：工学硕士学科、专业：食品科学与工程所在单位：化工与化学学院答辩日期：201

2、8年6月授予学位单位：哈尔滨工业大学ClassifiedIndex:Q946.1U.D.C:619DissertationfortheMasterDegreeinEngineeringTHESEPARATIONANDEFFECTSONLIPIDMETABOLISMOFHYPLIPIDEMICPEPTIDESFROMKOREANPINENUTSCandidate:ShaoSujuanSupervisor:Prof.WangZhengyuAcademicDegreeAppliedfor:MasterofEngineering

3、Specialty:FoodScienceandEngineeringAffiliation：SchoolofChemicalEngineeringandChemistryDateofDefence:June,2018Degree-Conferring-Institutio:HarbinInstituteofTechnology哈尔滨工业大学工学硕士学位论文摘要高脂血症是一种由于血脂异常引发的慢性综合征，严重威胁着人类的健康。近年来，许多研究表明源于食物蛋白的生物活性肽具有显著的降血脂效应，且药效持续长，副作用小。降血脂

4、活性肽作为一种能有效改善体内血脂平衡的天然活性物质，受到了广大学者的关注。本文以红松松仁蛋白为原料，采用酶法制备、体外降脂实验筛选获得松仁降脂肽，对其进行分离及活性跟踪研究，并通过建立高脂模型进行动物实验探究松仁降脂肽对小鼠脂质代谢的影响。利用酶法制备松仁降脂肽，通过结合胆酸盐和抑制胆固醇胶束溶解度实验筛选出制备降脂肽的最佳用酶为碱性蛋白酶，并以水解度为指标，确定加酶量、底物浓度、酶解温度、酶解pH的最佳条件。在单因素试验的基础上，进行响应面Box-Behnken中心组合试验设计，优化工艺参数，得到制备松仁降脂肽的最优酶

5、解条件为pH8.0、温度为53℃、加酶量为8800U/g，底物浓度1.2%，在此响应面优化条件下的实际平均水解度达43.15%。以结合胆酸盐及抑制胆固醇胶束溶解度能力为指标，对酶解时间为1~6h的松仁肽进行体外降脂活性筛选，最终确定酶解4h的松仁降脂肽体外降脂活性最高，作为后续实验样品。对松仁降脂肽经过DA201-C大孔树脂、DEAE-52离子交换层析以及SephadexG-25凝胶色谱层析逐级分离，获得活性最强组分P75-B-b，其胆固醇胶束溶解度抑制率和甘氨胆酸钠结合力达86.5%和63.45%。对组分P75-B-b

6、进行ESI-MS测定，结果表明其离子峰主要分布1000m/z以下，丰度最高的峰对应为518.52m/z，推测约为2~5个氨基酸组成。氨基酸组成分析表明P75-B-b疏水性氨基酸含量较高，富含精氨酸和脯氨酸，这可能是其体外降脂活性较高的重要原因。建立高脂动物模型，研究松仁降脂肽的体内降脂效果。结果表明松仁降脂肽能明显缓解高脂小鼠体重的上升，降低肝脏指数，调节高脂小鼠血脂平衡，缓解高脂模型给小鼠带来的肝功能受损。中、高剂量的松仁降脂肽还能有效增加小鼠粪便胆汁酸的排泄量，降低小鼠胆固醇水平。通过分析、测定小鼠胆固醇代谢关键酶活

7、性及相关基因的表达，阐述松仁降脂肽调控脂质代谢的潜在作用途径。酶活性实验结果表明一定剂量的松仁降脂肽能显著促进CYP7A1和LCAT酶活性，降低ACAT2酶活性，对于HMG-CoAR则无明显作用；实时荧光定量PCR检测结果表明一定剂量松仁降脂肽能显著上调调控胆固醇分解代谢的CYP7A1、PPARα的表达，并能显著上调对于调控胆固醇逆转运的LDL-R的表达，还可以显著下调调控胆固醇吸收代谢的ACAT2基因水平，I哈尔滨工业大学工学硕士学位论文但对于调控胆固醇合成代谢的HMG-CoAR、SREBP2基因的表达无明显效果。由此

8、推测，松仁降脂肽通过促进胆固醇的分解和逆转运，以及抑制胆固醇的吸收等代谢途径实现体内降脂效应的。关键词：松仁蛋白；降脂活性肽；分离；活性跟踪；高脂血症；脂质代谢II哈尔滨工业大学工学硕士学位论文AbstractHyperlipidemiaisachronicsyndromecausedbydyslipidemia,w