肺炎链球菌糖代谢蛋白ccpa对荚膜多糖的调控研究

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2、齡#S尹f伊教授成纖遂戯i医/堯;蒲常歷室r襄譯:请:T,^襄.與.夸泉i硕斗t?旣S㈱学齐蒂顯、,;一,"r:乃.終;‘'%|營.心輔月!’菊.47蟲;r巧爲/:)U為,齡讓.,,,錢穿-喪务表鱗.;等裝.京巧/:琴讀v.v襄.气於>.-讓讀>l’A、義:^:^藥?發L苗:這爸、5野沁氏,廣.方父讓,心馨該沁£_霸藉齡啸分类号;R378.1邮C;密级:重庆医科大学硕±学位论文论文题目肺炎链球茵

3、糖代谢蛋白CcpA对芙膜多糖的调控研巧作者姓名王丽滨指导教师姓一兵教授伊远学教授名(职称、单位名称)尹重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室申请学位级别硕±学科、专业名称晦床检验诊断学__论文答辩年月2015年5月20巧年5月重庆医科大学巧巧生学位论文独创性声明本人申明所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加W标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果,

4、也不包含为获得重庆医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料,与我同工作的同志对本巧究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处一,本人承捏巧相关责任。学位论文作者签名.:巧;日期:WiSI;学位论文版权使用授权书:本人完全了解重庆医科大学有关保护知识产权的规定,即研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属重庆医科大学。本人保证毕化离校后,发亲论义或使用论文工作成果时署名单位为重庆医稱大学。学校有权保留并向国家有关部口

5、或机构送交论文的复印件和碰盘,允巧论义被查阅和借阅。学校可W公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除化)、,并编入有关数捂库迸行检索,可采用影印缩印或其他手段保存论文。巧密论文在解密后适用本授权书。'■.■?.王"漆论文作者签名:ft、指导教师签名:日期:如£.W目录英巧缩略语名词对照1中文摘要3英文摘要5正文:cA对类膜多糖的调控研巧7肺炎链球茵糖代谢蛋白Cp一第部分肺炎链巧苗CcpA蛋白的保守性分析W及与CPS基因座启动子区域

6、相互作用的验证91.实验材料91.1菌株及质粒91210.实验动物110.3实验试剂1.4主要仪器112.实物法112.1ccM目的基因的PCR扩増12--2.2pET28a+cc的重组表达质粒的构建12()2.3重组CcpA蛋白的诱导表达及纯化122.4多克隆抗体的制备132.5ELISA法检测抗血清效价132乂Western印迹分巧CcpA蛋白保守性132.7EMSA验证CcpA蛋白与C护启动子序列的结合

7、143.实验结果15义1基因扩増产物的鉴定15-ET-28a+4163.2cc护重组巧粒的构建p()3.3CcpA重組蛋白的诱导表达及纯化163.4抗CcpA多克隆抗体的巧价分析n3.5CcpA蛋白保守巧表达分析173.6EMSA验证CcpA蛋白与CPS启动子片段的结合184.讨论19第二部分肺炎链球苗CcpA蛋白对CPS的调控作用研巧211.实验材料211.1苗株和211.2322实^剂1.3主要仪巧

8、242.实验方法242.1CCV4缺失株D39Acc/4的构建与鉴定24/p2.2CC4回复株(D39Acc>/l::c5/0的构建与鉴定护;q262.3英膜多辖含量检測262.4实时巧光定SPCR272.5统计方法273.实验结果273.1CCM缺失株D39Ac鉴定27(巧如的构建与3.2成功构建ccvl回D39ACC的35/复株(3.3ccCPS含量的变化35M基因缺失或回复表达后,细菌4

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