罗非鱼性别分化相关基因纵向表达模式的研究

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1、分类号••Q344+.1密级：公开UDC：591.3学号：2111201103广i海洋太#硕士学位论文罗非鱼性别分化相关基因纵向表达模式的研究刘加慧指导教师：王辉教授_________________申请学位类别：理学硕士__________________专业名称：海洋生物学________________研究方向：海洋经济动物发育生物学学院名称：水产学院__________________中国•湛江2015年6月#往铪夂答#奏A会粗成主席：v/"^i委员4^#X导师：1農’丰'时间：，石.j广东海洋

2、大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名.•1〇丨5年S月>曰学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权广东海洋大学可以

3、将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于1、保密□，在______年解密后适用本授权书。2、不保密<(请在以上相应方框内打“V”）作者签名：>丨5：年<月如曰导师签名：1年S月如日罗非鱼性别分化相关基因纵向表达模式的研究摘要性别分化是一些诱导信号作用下性别决定基因选择性地表达的结果。温度和外源性激素是生产上诱导单性鱼常用的手段。为了了解温度、17α-甲基睾丸酮(17α-methyltestosterone,MT)对罗非鱼性

4、别分化相关基因纵向表达的影响模式，本研究以吉富品系尼罗罗非鱼(Oreochromisniloticus,GIFTstrain)为研究对象，通过Box-Behnken实验设计，利用RT-PCR技术检测不同诱导环境下罗非鱼性别分化期Sox9a、ARα和GATA4基因的纵向表达水平，并运用响应曲面法(Responsesurfacemethodology,RSM)分析这些性别相关基因的纵向表达模式，旨在为罗非鱼性别分化机制的进一步研究提供参考。具体研究如下：（一）温度及MT联合诱导下Sox9a基因表达的纵向变化

5、Sox9是雄性性别决定主效基因Sry的直接下游靶基因，Sox9a已被证明在鱼类睾丸形成和发育中起重要作用。结果显示：温度的一次效应和二次效应对吉富鱼性腺组织中Sox9a表达有极显著影响(P<0.01)；17α-甲基睾丸酮的一次效应和二次效应对Sox9a表达无显著影响(P>0.05)；诱导持续时间的一次效应不显著(P>0.05)，但二次效应极显著(P<0.01)；温度和诱导持续时间的互作效应显著(P<0.05)，而温度和17α-甲基睾丸酮、17α-甲基睾丸酮和诱导持续时间之间的互作效应都不显著(P>0.0

6、5)。三因子影响度大小依次为：温度>诱导持续时间>17α-甲基睾丸酮。经响应曲面分析，随着温度逐渐升高，Sox9a表达先出现轻微下调，之后呈上调趋势；随着诱导时间的延长，Sox9a基因表达呈先上升后下降的抛物线型。实验建立的性腺Sox9a表达回归模型的决定系数R2和校正决定系数Adj.R2分别为0.9778、0.9493，表明构建的模型拟合恰当，可以为温度、17α-甲基睾丸酮诱导下吉富鱼性别分化期Sox9a基因表达的纵向变化提供参考依据。（二）温度及MT联合诱导下ARα基因表达的纵向变化雄激素的生理作用

7、主要是通过雄激素受体(androgenreceptor,AR)介导的。结果表明：温度、17α-甲基睾丸酮和诱导持续时间三因子的一次效应和二次效应对ARα基因表达都有极显著(P<0.01)或显著影响(P<0.05)；三个因子间均不存在互作效应(P>0.05)。三因子影响度强度依次为：温度>诱导持续时间>17α-甲基睾丸酮。由响应曲面模型分析，在实验设置温度范围内，ARα基因表达随着温度的升高呈上调趋势；ARα基因表达随17α-甲基睾丸酮浓度的增大先上调后下调；随着诱导持续时间的延长，ARα基因表达持续上调

8、。构建的性腺ARα表达回归模型的决定系数R2和校正决定系数Adj.R2分别为0.9972、0.9937，表明构建的模型拟合恰当，可以准确预测温I度、17α-甲基睾丸酮诱导下吉富鱼性别分化期ARα基因表达的纵向变化。（三）温度及MT联合诱导下GATA4基因表达的纵向变化GATA4是参与哺乳动物性别决定和性别分化的重要转录调控因子，然而，GATA4在鱼类繁殖中的作用却知之甚少。结果显示：温度、17α-甲基睾丸酮和诱导持续时间三因子的一次效应和二