秀丽线虫细胞色素b5及其还原酶调控多不饱和脂肪酸的合成

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1、＇？分类号学号Ｍ１２０８４１ＵＤＣ密级辕叫义葦ＹＡＮＧＺＨＯＵＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＩＪ硕壬学佐冷文（学术型）秀丽线虫细胞色素ｂ５及其还原酶调控多不饱和脂肪酸的合成胡英指导教师姓名；肖丽霞教授，扬州大学，江苏扬州，２２５００９梁斌研究贯．露明动物研究所．云南昆明．６５０２２３申请学位级别：硕去学科专业名称：营养与食品卫生学论文提交日期：２０巧年６月论文答辩日期：２０１５年５月２６日学位授予单位．；扬州大学学位授予日期２０１５年６月３０日答辩委员会主席：狸成凯教授—、－－．－？

2、＇‘■—，胃Ｉ—■■２０１５０６：－＇■年月款号暮＞苗慈Ｖ＇■．．．．沪＼扣苗弘，Ｋ＇、．一占Ｖ－？＇＇＇—＇？■？■７－．Ｖ：．ｉ．ＶｔＪ’．．、’护一／品。Ａ，＇．■嘴令心－声得＇－喻如辜恥苗苦■摘要Ｐｏ多不袍和脂肪酸（ｌｙｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄｆａｔｔｙａｃｉｄｓ，ＰＵＦＡｓ）是许多细胞及生理活动中非常重要的成分，机体多不饱和脂肪酸的平衡影响着生物体正常的生理功能。哺乳动物体内合一个耗氧的过程一成多不饱和脂肪酸实际上是，饱和脂肪酸在系列酶诸如细胞色素ｂ５、黄素蛋白

3、－ＮＡＤＨ－ｂ５还原酶Ｎｃｂ５ｏｒ）和脂肪酸去饱和酶等蛋白的共同作用依赖型细胞色素（下形成多不饱和脂肪酸。已有研究表明在小鼠、利什曼原虫和拟南芥中，特定的脂肪酸合成缺陷与细胞色素ｂ５还原酶或者与细胞色素ｂ５相关－，但对ＮＡＤＨ细胞色素ｂ５还原酶、细胞色素ｂ５、硬脂酌辅酶Ａ去饱和酶Ｗ及其他的去饱和酶之间的相互关系还未曾报道。在秀丽线虫多不饱和脂肪酸合成过程中ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶和细胞色素ｂ５是哪种形式的存在并发挥着作用还不清楚－－－，也不知道秀丽线虫中从ＦＡＴ１ＦＡＴ７的脂肪酸去饱和酶在去饱和作用过程中是否需要ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶和细胞色

4、素ｂ５的共同参与来激活并发挥功能？本研巧Ｗ秀丽线虫作为模式生物，通过分子生物学和遗传学方法探索属于Ｐ４５０酶系超家族基因的ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶和细胞色素ｂ５影响多不饱和脂肪酸合成的具体机制ＲＮＡ－。运用干扰抑制基因表达的方法来抑制ＮＡＤＨ细胞色素ｂ５还原酶和细胞色素ｂ５的基因－，并将提取的脂肪酸采用气相色谱来检测脂肪酸成分的变化。利用薄层色谱气相色谱连用的方法检测秀丽线虫脂肪含量的变化。本研巧还运用巧光实时定量ＰＣＲ检测秀丽线虫相关脂肪酸合成与分解关键基因的表达量及用基因过表达绿色巧光蛋白的巧光强度检测蛋白表达水平。并利用外源添加所缺脂

5、肪酸的方法来缓解其缺陷的表型。在本研究中－，寻找到ＮＡＤＨｂ５还原酶和细胞色素ｂ５依赖型细胞色素，Ｗ及他们在秀丽线虫不同的去饱和酶活性功能发挥过程中所起的作用－。本研究发现线虫中ＮＡＤＨ细胞色素ｂ５还原酶的同源基因为如０－７９细胞色素ｂ５；的同源基因为Ｈ个基－－；沾５７因功能缺失后糾和〇．、，线虫脂肪酸成分发生显著的变化。邸〇产＿）干扰株脂滴变小－卵减少、多不饱和脂肪酸含量和脂肪储存量减少。另外，抑制如０Ｊ９导致生长发育变缓，－５－抑制娜６．７导致。在脂肪酸去饱和酶基因表达的研究过程中如寿命缩短等多种表型，皆〇－沁２此６此７上－和巧如＿５．ｉ明显

6、使／、／和／调。外源补充所缺脂肪酸缓解其缺陷发现当邸〇八１８１Ｃ２０６：３ｎ３、Ｃ８：３ｎ６和：４ｎ时０：３ｎ６添加Ｃ，其下游产物都可Ｗ部分恢复，但添加Ｃ２时，Ｃ２０－：４ｎ６没。而汝５７：ｎ９、Ｃ：、：ｎ、其下游产物有任何恢复嘴．外源加入Ｃ１８ｌ１８２ｎ６Ｃ１８３３１Ｃ１８：３打６、Ｃ２０：３ｎ６和Ｃ２０：４ｎ６等六种脂肪酸时，都能将其下游产物的脂肪酸和生长表型等５－５主要与硬脂醜辅酶Ａ去饱和酶（ＦＡＴ－恢复。细胞色素ｂ（ＣＹＴＢ．１）６、ＦＡＴ７）共同作用－－－－－调控脂肪酸合成，而细胞色素ｂ５还原酶（ＨＰ０１９）与ＦＡＴ１、ＦＡＴ２、ＦＡＴ３和

7、ＦＡＴ４共－同作用－２和ＦＡＴ，主要与ＦＡＴ４共同作用调节秀丽线虫多不饱和脂肪酸的合成。关键词－细胞色素ｂ５脂肪酸去饱和酶多不饱和脂肪；ＮＡＤＨ还原酶；细胞色素ｂ５；；酸；秀丽线虫ＩＩＡｂｓｔｒａｃｔＰｏｌｙｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄｆａｔｔｙａｃｉｄｓ（ＰＵＦＡｓ）ａｒｅｅｓｓｅｎｔｉａｌｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｆｏｒｍａｎｙｃｅｌｌｕｌａｒａｎｄｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｐｒｏｃｅｓｓｅｓ．ＯｒｇａｎｉｓｍｒｅｕｉｒｅｄａｂａｌａｎｃｅｏｆＰＵＦ