田鼠巴贝虫病分子调查及其诊断抗原高通量筛选

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1、SOOCHOWUNIVERSITY硕士学位论文论文题目田鼠巴贝虫病分子调查及其诊断抗原高通量筛选研究生姓名_______________黄继磊指导教师姓名______________诸葛洪祥专业名称生物化学与分子生物学研究方向_____________感力与免疫论文提交日期_____________2〇15年4月苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研宄工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研宄成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学

2、位证书而使用过的材料。对本文的研宄作出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名:考射f曰期：苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研宄所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被査阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论

3、文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在年月解密后适用本规定,非涉密论文y论文作者签名j綠日期:前十’。导师签日辕X上-卜田鼠巴贝虫病分子调查及其诊断抗原高通量筛选中文摘要中文摘要目的：对中缅边境地区发热人群田鼠巴贝虫（Babesiamicroti）感染情况调查及田鼠巴贝虫病相关诊断抗原候选分子高通量筛选鉴定。方法：1）首先对2014年6～8月期间在中缅边境地区收集的200份排除疟疾感染发热病人的全血血样提取DNA，然后应用基于田鼠巴贝虫18srRNA序列与微管蛋白序列设计引物进行巢式PCR扩

4、增和测序分析鉴定田鼠巴贝虫感染情况。2）基于田鼠巴贝虫公共数据库筛选分泌蛋白、重复序列和PiroplasmaDB公开数据库中部分田鼠巴贝虫与恶性疟原虫、牛巴贝虫同源序列筛选构建本地数据库，从田鼠巴贝虫（BabesiamicrotiATCC®PRA-99TM）感染的BALB/c小鼠血液中提取田鼠巴贝虫RNA经反转录为cDNA，以田鼠巴贝虫cDNA为模板扩增目的基因片段。利用无缝克隆技术连接目的基因片段的扩增产物和质粒载体pEU-His，经过重组质粒的鉴定，最后获得含有目的基因片段的表达质粒。利用试剂盒提取重组质粒后，采用麦胚无细胞蛋白表

5、达体系进行表达，用western-blot技术分析鉴定出表达正确的蛋白。通过蛋白芯片技术用不同感染时期鼠血清对表达正确的蛋白进行高通量筛选。结果：1）在200份发热病人巢式PCR检测有2份病人全血经两种巢式PCR和测序分析鉴定为田鼠巴贝虫感染，并经进化序列分析为人兽共患型田鼠巴贝虫株。2）筛选222个目的基因片段构建本地数据库，PCR成功扩增了215个片段，无缝克隆成功构建了186个重组质粒，麦胚无细胞蛋白合成系统成功表达了167个重组蛋白。以感染田鼠巴贝虫的BALB/c小鼠不同时期血清为抗体，利用蛋白芯片技术从167个重组抗原中筛选

6、出10个重组抗原，分别是：BmSP44、BmRS8、BmRS21、BmRS28、BmRS29、BmHP33、BmHP37、BmHP41、BmHP42和BmHP43。结论：在我国云南省中缅边境地区存在可感染人和其他哺乳动物的田鼠巴贝虫；用感染田鼠巴贝虫的BALB/c小鼠不同感染时期血清共筛选出10个重组抗原，但其应用于人田鼠巴贝虫感染的诊断还需进一步验证。I中文摘要田鼠巴贝虫病分子调查及其诊断抗原高通量筛选关键词：田鼠巴贝虫；巢式PCR；诊断；无缝克隆；麦胚无细胞蛋白合成系统；重复序列作者：黄继磊指导老师：周霞胡薇诸葛洪祥II田鼠巴贝虫

7、病分子调查及其诊断抗原高通量筛选英文摘要ThemolecularsurveyofBabesiosisandthehighthroughput-screeningofdiagnosticantigensofBabesiamicrotiABSTRACTBabesiosisisatypicalzoonotic,emergingdiseasecausedbyatick-borneintraerythrocyticprotozoaninfectionwithBabesiaspp.,anditalsocanbetransmittedbyblood

8、transfusion.Babesiosisimposesanincreasingthreattopublic-health.Tothepatientswithimmunocompromised,theclinicalm