燕麦ems突变体库的构建及分析

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1、密级：论文编号：－中国农免科学悦学位论文燕麦ＥＭＳ突变体库的构建及分析、Ｅｓ化ＷｉｓｈｍｅｎｔａｎｄＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＥＭＳＭｕ化ｎｔＬ化ｒａｒｙｉｎＯａｖｃ／ｉ＂。＂抓Ｘ．心）＇硕±研究生霍朋杰指导教师；张宗文研究员申请学位类别：农业推广硕±专业领域名称：作物培养单位：作物科学研究所研究生院２０１５年６月Ｓｅｃｒｅｃ：Ｎｏ．ｙＣｈｉｎｅｓｅＡｘａｄｅｍｙｏｆ乂ｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓｇ

2、ＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔａｎｄＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＥＭＳＭｕ化ｎｔＵｂｒａｉｙｉｎ〇２ｉｉＡｖｅｎａｎｕｄａＬ．｛）Ｍ．Ｓ．Ｃａｎｄｉｄａ化；ＨｕｏＰｅｎｇｉｅｊＳｕｅｒｖｉｓｏｒ：Ｐｒｏｆ．ＺｈａｎＺｏｎｗｅｎｐｇｇＤｅｒｅｅ：Ｍａｓｔｅｒｏｆ乂ｒｉｃ山ｔｕｒａｌＥｘｆ：ｅｎｓｉｏｎｇｇＳｅｃｉａｌｔ：Ｃｒｏｐｙｐ化ｎｅ２０１５独创性声明进行的研究工作及取得的研究成本人声明所呈交的论文是我个

3、人在导师指导下果。尽我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发教育机构的学位或证表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业科学院或其它一己在论文中作了书而使用过的材斜。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均明确的说明并表示了谢意。■’时间；＾年月日研究生签名：奶义啼勺关于论文使用授权的声明目用学位论文的规定，Ｐ：中国农业科本人完全了解中国农业科学院有关保留、使，可Ｗ采用影印、缩学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅印

4、或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可Ｗ用不同方式在不同媒体上发表。、传播学位论文的全部或部分内容玉年ｉ月日、时间；研究生签名；《贿时间：．年Ｔ月日导师签名；交争中国农业科学院硕±学位论文评阅人、答辩委员会签名表论文题目燕麦ＥＭＳ突变体库的构建及分析论文作者霍朋杰专业作物研究方向不区分研究方向指导教师张宗文培养单位（研究所）作物科学研究所＾主名职称４位专业签名＾ＩＩ评＾阅―犬：ｉ硕导□中国科学院遗传与

5、发生物化学与化化Ｉ仿成ｙ乂／博导□育生物学研究所分子屯领学！鮮４的＾胃博导□育生物学研究所分子生物学／乎伽＆］Ｕ硕导□中国农业大学农业与作物遗传气、州ｐｆｃ曰姑喊Ｉ胃辩博导□生物技术学院削叫ｌＡ／ｋ硕导□中国农业大学农业与作物遗传：本白巧新权＾ｎ心委＾胃Ｓ博导□生觀术学院育种员王、＊臣硕导□中国农业科学院作物作物种质资ＬＹｒ瓦Ｕ／博即科学研究所源学ｈ／叩＾硕导□中国农业科学院作物作物种质资博导□群研究所

6、源学ＩＩ［Ｉ会议记录（秘书）炎達聲２０－－论文答辩时间地点时间：１５０５２２地点：国家种质库会议室摘要燕麦是重要的粮饲兼用作物，构建燕麦EMS突变体库对燕麦功能基因组学研究和遗传改良有重要意义。本实验利用化学诱变剂甲基磺酸乙酯（EMS，ethylmethanesulfonate）处理燕麦品种花早2号，对M2植株进行全生育期调查，对部分株系进行突变位点的分子检测，主要结果如下：1、燕麦EMS处理和突变类型鉴定。利用浓度为0.7%的EMS溶液处理花早2号种子15h，获得了4083

7、株的M1材料；对其中的2000个单株种植M2株行，并进行全生育期调查，鉴定其表型变化；对其中2份黄化突变材料种植了M3家系，进行黄化突变性状的稳定性验证。结果表明，燕麦经EMS处理后表型变异巨大，在M2代材料共发现表型突变材料196份，变异率为9.8%，变异类型非常丰富，包括幼苗习性、叶片、分蘖数、株高、穗部形态以及成熟期等多个突变类型。其中，对部分M3材料种植后证实，突变的黄化苗特性可以稳定遗传。2、燕麦突变体库的TILLING检测。从芹菜中提取CELI内切酶粗提物，以合成的含有单个碱基差异的片段

8、为模板对提取的CELI内切酶进行活性检测，结果发现所提取的内切酶具有较高的活性；同时，对酶切反应的温度、酶切时间、提取物的用量等条件进行探索，构建了酶切检测体系。利用该体系，对突变体库进行TILLING检测，共筛选出两个与黄化苗相关突变位点。3、突变体的分子检测。利用筛选出的10对SSR引物对288个二倍池进行检测，检测到72个突变位点，最终计算得出突变频率为1/20kb。根据水稻黄化基因和株高基因进行特异性引物设计98对引物，最终筛选出6对引物可以扩增出单一条带。以