烟草激活标签突变体库的构建与分析

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1、万方数据密级：论文编号：中国农业科学院学位论文烟草激活标签突变体库的构建与分析ConstructionandAnalysisofActivationTaggingPopulationinTobacco(NicotinatabacumL．)博士研究生：刘峰指导教师：路铁刚研究员申请学位类别：理学博士专业：生物化学与分子生物学研究方向：基因组学与蛋白质组学培养单位：生物技术研究所中国农业科学院研究生院提交日期2014年6月万方数据Secrecy：No．ChineseAcademyofAgriculturalSc

2、iencesPh·DDissertationConstructionandAnalysisofActivationTaggingPopulationinTobacco(NicotinatabacumL．)Ph．DCandidate：LiuFengSupervisor：Prof．LuTiegangMajor：BiochemistryandMolecularBiologySpecialty：GenomicsandProteomicsJune2014万方数据独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的

3、研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：b峡时间：7p／够年r月刀日关于论文使用授权的声明本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即：中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。

4、同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名：文，1吵李_导师签名：时间：)。，够年歹月矽日时间：川汐年夕月加日万方数据中国农业科学院博士学位论文评阅人、答辩委员会签名表论文题目烟草激活标签突变体库的构建与分析生物化学与基因组学与论文作者刘峰专业研究方向分子生物学蛋白质组学指导教师路铁刚培养单位(研究所、中心)生物技术研究所硕(博)姓名职称单位专业签名导师硕导口＼＼评博导口硕导口＼＼

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6、阅博导口人＼硕导口博导口公口槲硕导口中国科学院生物化学与1

7、世咛：主孙敬三研

8、究员博导∥植物研究所分子生物学X弋响k’席硕导口生物化学与何季，驰何奕醌教授首都师范大学分子生物学博导影硕导口中国科学院生物化学与邱金龙研究员博导函微生物研究所分子生物学蜘彳优悠生物化学与。kp～李乐攻教授硕导口／首都师范大学分子生物学毒俘也博导形NL／料硕导口生物化学与蠲4王海洋研究员博导一生物技术研究所分子生物学委王志兴研究员硕导口，生物化学与孵，贝博导西生物技术研究所分子生物学，林浩教授硕导口／生物化学与机博导囱生物技术研究所分子生物学会议记录(秘书)彩洳循论文答辩时间地点呻f砑坛比方钟虿P易。毒大2

9、／穸髟诗彦毕·多窜、沪，眵．f、谚万方数据摘要烟草是植物生物学研究的模式植物，又是世界上重要的经济作物，随着二倍体烟草全基因组测序的完成，烟草研究进入了后基因组学时代。在功能基因组学时代，突变体是研究基因功能最直接、最有效的途径之一。本研究作为烟草基因组计划重要组成部分之一，构建了烟草激活标签突变体库，并从突变表型观察、T-DNA插入位点分布规律和插入位点旁侧基因的表达分析三个方面对该突变体库做出评价，为大规模挖掘烟草基因的功能奠定基础。1．本研究以烟草主栽品种“红花大金元”为受体，利用优化的农杆菌介导的遗

10、传转化方法，创制了10万份激活标签(pSKl015)突变体。在遗传转化过程中，采用100—150mg／L的特美汀(Timentin)有效抑制细菌的生长；将暗培养时间延伸至共培养后的第一轮筛选，提高了烟草的再生效率；高强度的Basta筛选压力，产生了高阳性率的转基因植株(90％)。对34份转基因株系southernblot分析显示，88％的测试株系含有一到两个T-DNA插入，平均1．6个拷贝，因此10万份突变体包含14．4万个T-DNA插入。2．本研究经过三年的大田突变表型鉴定，累计鉴定近千份具有突变表型的突

11、变体，突变类型主要包括叶形态、花形态、株高、分枝、腋芽、育性、花期等。2012年种植了4，105份Tl代株系，共鉴定出311份具有突变表型的T1代株系，2013年种植其中234份有突变表型的T2代株系，调查表型在T1和T2代间的遗传规律，59份(1／4)T2代植株保持了T1代的表型，其中36份(1／6)呈现出显性和半显性表型。3．本研究利用融合嵌套PCR(FPNI，fusionprimerandnestedint