沃尼妙林对脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠tlr4和cd14表达的影响

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1、Universitycode：10223Classifiedcode：R392.5Graduatenumber：XS1291011Confidentialdegree：PublicHeilongjiangBayiAgriculturalUniversityMasterDissertationTheeffectofvalnemulinontheexpressionofTLR4andCD14inacutelunginjurymiceinducedbylipopolysaccharidePostgraduate：WuZhi-yongSupervisor：Pro

2、fessorChenZhi-baoMajor：CellbiologyResearchdirection：CellsignaltransductionCollege：CollegeoflifescienceDaqingChinaJune,2015摘要急性肺损伤（Acutelunginjury，ALI）属于临床常见危重症，容易引起急性、进行性加重的呼吸衰竭，一般由心源性以外的各种肺内外致病因素所导致。炎症反应是ALI的主要发病机制，内毒素（LPS）是炎症反应的首要致病因子，在LBP的存在下，LPS与靶细胞表面的CD14受体相结合，形成LPS-LBP-CD14

3、的三联复合物。该复合物在MD-2协助下与TLR4作用，转导LPS信号到细胞内，激活MyD88、IRAK、TRAF6以及TIRAP、MAL，从而活化NF-κB和MAPKs信号转导通路，生成和释放多种细胞因子和炎症介质，产生以中性粒细胞浸润、微血管内皮细胞损伤和蛋白液体渗漏为特征的炎症反应，最终导致急性肺损伤的发生。沃尼妙林（Valnemulin，VA）是新一代广谱的截短侧耳素类半合成抗生素，属二萜烯类，是动物专用抗生素。关于LPS诱导的ALI方面的报道主要围绕在LPS信号转导通路的下游，有研究证实沃尼妙林可以通过降低单核细胞、巨噬细胞等分泌和释放肿瘤坏死因

4、子-α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素1β（IL-1β）等炎性相关因子，起到有效保护ALI的作用。本研究旨在通过实时荧光定量RT-PCR和WesternBlot在细胞水平以及在体水平上探讨ALI中沃尼妙林对LPS信号转导通路上游受体TLR4和CD14表达的影响。首先利用LPS诱导的小鼠单核-巨噬细胞（RAW264.7）体外炎症模型，探索沃尼妙林对LPS诱导的RAW264.7细胞TLR4和CD14表达的影响，发现LPS刺激RAW264.7细胞后，可导致TLR4和CD14表达的增高；不同浓度的沃尼妙林预处理能够剂量依赖性的抑制LPS诱导的

5、TLR4和CD14的表达。此外，为了对沃尼妙林的临床疗效提供客观的评价指标，我们进一步验证了沃尼妙林在体内的抗炎作用。利用LPS诱导构建的小鼠急性肺损伤模型，探索沃尼妙林对急性肺损伤小鼠肺组织TLR4和CD14表达的影响，发现沃尼妙林可以抑制LPS诱导的急性肺损伤小鼠TLR4和CD14的表达，并且表达抑制呈剂量依赖性。该研究表明沃尼妙林有可能通过抑制LPS信号通路的上游受体TLR4和CD14的表达而实现抗炎和对急性肺损伤的保护作用。关键字：急性肺损伤，沃尼妙林，脂多糖，TLR4，CD14IAbstractAcutelunginjury(ALI)isaco

6、mmonclinicalcriticallydisease,whichiscausebyavarietyofriskfactorsinternalorexternallungexcludingcardiogenicfactors,leadingthedamageofpulmonarycapillaryendothelialcellsandalveolarepithelialcells,diffuseinterstitiallungoralveolaredemaandpulmonaryacuteinflammation.Themajormechanismo

7、fALIisinflammatoryreactionwhichiscausedbyendotoxin(LPS).LBPcanpromotethebindingbetweenLPSandmembraneCD14ofmononuclear/macrophagecells,toformthecomplexofLPS-LBP-CDl4andtoactivatemononuclear/macrophagecellsbyMyD88、IRAK、TRAF6,andTIRAP、MAL,whichactivateNF-kappaBandMAPKssignaltransduc

8、tionpathwayandreleaseavarietyofproinflam