氧化苦参碱对脂多糖诱导的胰腺星状细胞tlr4nf-κb信号通路的调节作用

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1、分类号：R57学校代码：10062密级：学号：2011702315硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：氧化苦参碱对脂多糖诱导的胰腺星状细胞TLR4/NF-κB信号通路的调节作用TITLE:EffectofOxymatrineonTLR4/NF-κBSignalPathwayinPancreaticStellateCellsInducedbyLPS一级学科：临床医学二级学科：内科学消化系病论文作者：荣亚梅指导教师：张志广天津医科大学研究生院二〇一五年五月分类号：R57学校代码：10062密级：学号：2011702315

2、学位类别：科学学位专业学位☑学科门类：医学硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：氧化苦参碱对脂多糖诱导的胰腺星状细胞TLR4/NF-κB信号通路的调节作用TITLE:EffectofOxymatrineonTLR4/NF-κBSignalPathwayinPancreaticStellateCellsInducedbyLPS一级学科：临床医学二级学科：内科学消化系病论文作者：荣亚梅指导教师：张志广天津医科大学研究生院二〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研

3、究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密。（请在相对应的方

4、框内打“√”）学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日中文摘要目的：观察氧化苦参碱（oxymatrine,OM）在脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的胰腺星状细胞（LTC-14细胞株）中对Toll样受体4（toll-likereceptor4,TLR4）通路中相关细胞因子的影响。其中包括：TLR4、髓样细胞分化因子88（myeloiddifferentiationfactor88，MyD88）、核转录因子-kappaB(nuclearfactorkappaB,NF-κB)、肿瘤坏死因子-α（TumorNec

5、rosisFactor-α，TNF-α）在基因和蛋白水平的表达变化。探讨OM治疗慢性胰腺炎（chronicpancreatitis,CP）纤维化的可能分子机制。方法：将LTC-14细胞株分为4个组，Control组，LPS组，OM+LPS组，OM组。Control组：加无血清无双抗的培养基培养3h。LPS组：加入含浓度为10μg/mlLPS的无血清无双抗的培养基孵育3h；OM+LPS组：先加入500μg/ml的OM在无血清无双抗的培养基中孵育30min，然后加入浓度为10μg/mlLPS继续刺激3h；OM组：单纯加入含500μg/mlOM的无

6、血清无双抗的培养基孵育3h。该实验中应用到的实验方法（1）采用免疫荧光方法检测LTC-14细胞株TLR4的表达。（2）应用免疫细胞化学技术了解NF-κB在细胞浆和细胞核的表达。（3）利用WesternBlot技术检测氧化苦参碱对LPS诱导的LTC-14细胞中TLR4、MyD88及NF-κB在蛋白水平表达的影响。（4）通过实时荧光定量PCR检测氧化苦参碱对LPS诱导的LTC-14细胞中TLR4、MyD88及NF-κB在基因水平的表达变化。（5）通过ELISA试验检测细胞培养基中TNF-α的蛋白水平。结果：与Control组相比，LPS组TLR4

7、、NF-κB在mRNA和蛋白水平上表达量显著增加，同时OM+LPS组较LPS组表达显著下降，有统计学差异（p<0.05）。OM组较Control组对比，无统计学意义。通过免疫细胞化学技术可以观察到LPS组较Control组发生显著的NF-κB核内易位,OM+LPS组较LPS组,核内易位明显减少。OM也可以下调LPS诱导的细胞培养基中TNF-α的蛋白表达，MyD88mRNA和蛋白表达各组之间比较，无统计学差异。结论：对LPS诱导的LTC-14细胞TLR4、NF-κBmRNA和蛋白表达及NF-κB向核内易位抑制作用可能是OM治疗胰腺纤维化的机制之

8、一。关键词：氧化苦参碱胰腺星状细胞脂多糖LTC-14细胞TLR4信号通路IAbstractObjective:Toinvestigatetheeffectsofox