梅毒螺旋体膜蛋白tp92致炎作用机制的初步研究

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4、刺激巨噬细胞和HMEC-1细胞，ELISA检测其促炎细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌水平。并根据预测的MyD88/NF-κB、MAPKs/p38和NLRP3/Caspase-1三条信号转导通路，分别用其特异性抑制剂PDTC（Pyrrolidinedithiocarbamicacid）、SB202190和Z-YVAD-FMK阻断，ELISA检测Tp92作用靶细胞前后促炎细胞因子的分泌水平差异。若促炎细胞因子分泌水平有显著下降，既用Westernblot检测Tp92作用靶细胞前后MyD88、NF-κB、MAPK1/2、p38MAPK、Caspase-

5、1和NLRP3分子的表达水平差异；最后通过总活性比色法定量检测Tp92作用靶细胞前后乳酸脱氢酶（lactatedehydrogenase，LDH）的活性变化。研究结果如下：有效表达一个约92kDa大小的分泌性蛋白，经纯化后纯度达85%以上；一定浓度的Tp92蛋白可显著诱导巨噬细胞和HMEC-1细胞产生TNF-α、IL-1β和IL-6；特异性阻断MyD88/NF-κB和MAPKs/p38信号通路后，ELISA结果显示巨噬细胞和HMEC-1细胞分泌的促炎细胞因子I较阻断前均无明显降低，LDH活性检测结果显示LDH的活性也无明显差异，而特异性阻断NLRP3/Casp

6、ase-1信号通路后，ELISA结果显示巨噬细胞和HMEC-1细胞分泌的TNF-α、IL-6和IL-1β较阻断前有明显降低（P＜0.05）；Westernblot结果显示Caspase-1和NLRP3分子的表达水平较阻断前均有明显降低；LDH活性检测结果显示LDH的活性较阻断前也有明显降低（P＜0.01）。本实验得出结论，Tp92能促进巨噬细胞和HMEC-1细胞产生促炎细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6，并且Tp92致使巨噬细胞和HMEC-1细胞产生炎症反应可能是通过NLRP3/Caspase-1途径。关键词：梅毒螺旋体；Tp92；炎症；信号通路IIPi

7、lotstudyonproinflammatoryeffectanditsmechanismofTreponemapallidumoutermembraneproteinTp92GanLin(MajoringinPathogenicBiology)DirectedbyProfessorZhaofei-junAbstract:wechoosemacrophagesandHMEC-1cellswhichplayanimportantroleininnateimmunityandearlysyphilisastargetcells,andwishtoexploret

8、hecellularsignaltra