柠檬烯对指状青霉孢子萌发的作用初探

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1、学校代码10530学号201230151540分类号Q815密级公开硕士学位论文柠檬烯对指状青霉孢子萌发的作用初探学位申请人王笑指导教师陶能国教授学院名称化工学院学科专业化学工程研究方向生物化工二〇一五年四月五日湘潭大学学位论文原创性声明立进行研究所本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独，本论文不包含任取得的研究成果。除了文中特别加Ｗ标注引用的内容外品贝何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作。对本文的研究做出重要。本人完全意识到本声明的献的个人和集体，均己在文中Ｗ明确方式标明法律后果由本人承担。日期：年ｊ：

2、月日作者签名；ｉ策学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文全部或部分内容编被查阅和借阅。本人授权湘潭大学可Ｗ将本学位论文的入有关数据库进行检索，可采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。涉密论文按学校规定处理。日日期；Ｔ＾ｌ：年：月作者签名；丘東ｊｊ节；ｒ月曰导师签名：為曰期ｙ／ｊ年ｊクStudyontheeffectoflimonenetothegerminationofPenic

3、illiumdigitatumsporesCandidateWangXiaoSupervisorNengguoTaoProfessorCollegeCollegeofChemicalEngineeringProgramBiochemicalEngineeringSpecializationChemicalEngineeringDegreeMasterofEngineeringUniversityXiangtanUniversityDateApril,2015II摘要由指状青霉（PenicilliumdigitatumSacc）侵染柑橘引起的绿霉

4、病是最严重的柑橘类采后病害，最高可引起90%的采后腐烂损失。在柑橘绿霉病害发生过程中，油胞受损后释放的柠檬烯起到了重要作用，但是具体的作用机制还不清楚。本研究以指状青霉孢子为研究对象，研究了离体和活体条件下柠檬烯对指状青霉生长的影响，并分析了外源柠檬烯的流向。主要研究内容如下：（1）测定了不同数量级（104个/mL、105个/mL、106个/mL、107个/mL）的指状青霉孢子浓度和OD值之间的关系，构建标准曲线，在不同的数量级范围内，其线性关系良好，可以作为后续实验准确定量孢子浓度的依据。（2）测定了水琼脂培养基中添加柠檬烯后对不同浓度孢子萌

5、发率的影响。结果表明：孢子浓度为106个/mL和107个/mL时，柠檬烯在低浓度下（0-0.50μL/mL）促进孢子萌发，高浓度（>1.0μL/mL）下抑制其萌发，最大促进浓度分别为0.25μL/mL和0.50μL/mL。（3）测定了液体培养基（PDB）中添加柠檬烯后对不同浓度孢子萌发率的影响以及萌发率随时间的变化。结果表明：孢子浓度为106个/mL和107个/mL时，柠檬烯在低浓度下（0-0.50μL/mL）促进孢子萌发，高浓度（>1.0μL/mL）下抑制其萌发，最大促进浓度分别为0.25μL/mL和0.50μL/mL。研究还发现，孢子萌发率

6、随时间而增加，11h后萌发完全。（4）探讨了外源添加柠檬烯对柑橘绿霉病进程的影响。结果表明：自然采摘的柑橘果实在划破伤口后第4d开始腐烂，第6d达到98.9%，而没有划破伤口的柑橘以及消毒后的柑橘始终没有出现腐烂现象；柑橘油胞伤口上接种指状青霉孢子并分别培养48h、60h和72h后，柑橘的腐烂直径分别为2.12cm、3.34cm和6.64cm，显著高于划破油胞间隙后的腐烂直径，分别为1.16cm、1.58cm和4.71cm；在划破油胞的柑橘果实上添加5μL0.25-2.0μL/mL的柠檬烯能加速绿霉病的发病过程，诱导菌斑生长，浓度增加至4.0μ

7、L/mL时又抑制其发病；在划破油胞间隙的柑橘果实上添加5μL0.25-4.0μL/mL的柠檬烯能加速绿霉病的发病过程，诱导菌斑生长，浓度增加为4.0μL/mL时诱导作用开始减弱；随着油胞伤口和油胞间隙伤口添加柠檬烯的浓度增大，两者腐烂直径的差异逐渐缩小，当柠檬烯浓度为2.0μL/mL时，腐烂直径达到最大分别为4.95cm和4.98cm，两者无显著差异。（5）定性分析了柠檬烯在影响孢子萌发过程中的物质变化。结果表明：低浓度下（0-0.50μL/mL）柠檬烯不会转化为其他物质，高浓度下(>1.0μL/mL)有少量转化为α-松油醇。I（6）定量分析了

8、柠檬烯促进孢子萌发过程中孢内孢外柠檬烯浓度随柠檬烯初始添加量的变化。结果表明：孢子浓度为106个/mL时，柠檬烯浓度达到0.50μL/mL后，孢内柠檬