青藏高原卤虫孵化条件与遗传标记开发初探

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1、分类号密级公开＿＿ＵＤＣ学号２０１２１０１３０３０靑海师苑大学硕古学位论文青藏高原齿虫解化条件与遗传标记开发初探研究生姓名刘海珍，教授导师姓名（职称）都玉蓉宙谱堂份类别理挙硕壬学科专业名称生态学研究方向名称动物生理生态学旅义摇巧日期２０１５年３月论义答辩日期２０巧年６月堂份聘予单份青海师范大学学位授予日期２０１５年６月答辩委员会主席评阅人妈純，青海师范大学学位论文独创性声明本人声巧所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作

2、及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别＾加！乂标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得青海师范大学或其它教一育机狗的学位或证书而使用过的材料。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均臣在论文中做了明确的说明并表示了谢意。研究生签拿：日期：青海师范大学学位论文使用授权声明青海师范大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可Ｌ义采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期巧

3、的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可兴公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。论文的公布（包括刊登）授权由青海师范大学研究生部办理。。，化／．／研究生签省：禾１：：＾＾曰期３；｜若／导师签名；＾＾青藏高原齒虫禪化条件与遗传标记开发钥探摘要商虫作为重要的基础实验材料和经济动物资源，研究其解化条件和开发微卫星标记工具具有重要意义。本研究通过对柯柯盐湖面虫卵的僻育实验，探索了柯ＳＣＯ方法柯盐湖窗虫发育对温度和盐度的耐受条件；基于ＦＩＡ，构建青藏高原面虫的（ＡＣ）ｎ和（ＡＧ）ｎ微卫星富集文库，并筛选６对微卫星引

4、物，为窗虫资源评估和遗传分化研巧等提供遗传标记工具。主要研究结果如下：１、２５％〇盐度是柯柯盐湖面虫卵脾化和幼体发育的理想盐浓度。在７个盐度梯度中，随着盐度不断升高，柯柯盐湖齿虫卵的解化率平均值呈现下降趋势；但盐度低于２５％〇时，面虫卵虽可破膜，但无法发育为无节幼体，是无活为的破膜幼体，而当盐度为８０％〇时，面虫将不会解化。°’２、在２５％〇盐度条件下，柯柯盐湖面虫卵的最适解化温度为２６Ｃ，Ｗ２６Ｃ‘为基点，随着温度上升或降低窗虫卵解化率呈下降趋势；当温度上升到巧Ｃ或’下降到＾３Ｃ时，脖化率为０。３、挑取

5、平板上的阳性克隆进行培养，分别从（ＡＣ）ｎ文库和（ＡＧ）ｎ文库中随机挑选１２０个和２００个白色单菌落．ＷＭｌ３通用引物和对应探针序列（无生物素标记）进行ＰＣ民扩増，分别筛选到８０个和１２０个可能含有微卫星序列的阳性克隆经，测序得到阳性克隆率分别为６６．７％、６０．０％。４、依据得到的微卫星序列，用Ｐｒｉｍｅｒｐｒｅｍｉｅｒ５．０软件设计并合成引物６３２对，对个地理单元（青海、西藏）的１８个窗虫基因组ＤＮＡ扩増，筛选出６对具有多态性的面虫微卫星弓。Ｉ物关键词：青藏高原，商虫解化還传标记，ＩＰｒｅｌｉｍ

6、ｉｎａｒＳｔｕｄｙｏｎＡｒｔｅｍｉａｉｎｃｕｂａｔｉｏｎａｎｄｄｅｖｅｌｏｍｅｎｔｏｆｙｐｇｅｎｅｔｉｃｍａｒｋｅｒｓｏｎＡｒｔｅｍｉａｉｎＴｉｂｅｔａｎｐｌａｔｅａｕＡｂｓｔｒａｃｔＡｓａｋｉｎｄｏｆｉｍｐｏｒｔａｎｔｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｍａｔｅｒｉａｌａｎｄｅｃｏ打ｏｍｉｃａｎｉｍａｌｒｅｓｏｕｒｃｅ，ｌ：ｈｅｓｔｕｄｙｏｎ幻ｉｓｏｆｇｒｅａｔｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ．Ｉｎｔｈｉｓｒｅｓｅａｒｃｈｗｅｓｔｕｄｉｅｄｔｈｅ，ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ！

7、ｃｏｎｄｉｔｉｏ打ｓｆｏｒｉｎｃｕｂａｔｉｏｎｏｆ口ｅｇｇｓａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｐｅｄｓｉｘａｉｒｓｏｆｐｍｔ．ｌｔｔｉｃｒｏｓａｅｌｌｉｔｅｒｉｍｅｒｓＦｉｒｓｔ；ｈｅｓｕｄｏｎｈｅｉｎｃｕｂａｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｗａｓｍａｉｎｌｐ，ｙｙｆｂｃｕｓｅｄｏｎ化ｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｏｆ化ｅｏｔｉｍａｌｔｔｔｔｒｔ．ｐ；ｅｍｐｅｒａｕｒｅａｎｄｓａｌｉｎｉｙｃｏｎｃｅｎａｉｏｎＳｅｃｏ打ｄ，Ｔｏｉｓｏｌａ化ａｓｅｔｏｆａｖａｉｌａｂｌｅｍｉｃ

8、ｒｏｓａｔｅＵｉｔｅｐｒｉｍｅｒｓ，化ｅ（ＡＣ）ｎａｎｄ（ＡＧ）ｎｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅｅｎｒｉｃｈｅｄｌｉｂｒａｒｉｅｓｏｆａｒｔｅｍｉ