重组溶瘤腺病毒rcadc68.pⅸ-egfp的构建及其对结肠癌细胞增殖的影响

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1、SOOCHOWUNIVERSITY硕士专业学位论文构建及其对结肠癌细胞增殖的影响研究生姓名______石蠢___________指导教师姓名常树建专业名称肿瘤学研究方向消化道肿瘤的基础与临床论文提交日期2015年4月苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研宄工作所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外,本论文不含其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名:石4日期

2、:>心和》/苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定,即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研宄所(含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在______年_月解密后适用本规定。非涉密论文□论文作者签名：_日期：X4导师签

3、名：今如尤B期：v^重组溶瘤腺病毒RCAdC68.pIX-EGFP的构建及其对结肠癌细胞增殖的影响中文摘要重组溶瘤腺病毒RCAdC68.pIX-EGFP的构建及其对结肠癌细胞增殖的影响中文摘要目的本实验通过等温组装法构建重组溶瘤腺病毒RCAdC68.pIX-EGFP，并通过比较RCAdC68.pIX-EGFP与复制缺陷型重组腺病毒AdC68-ΔE1-EGFP对结肠癌细胞的杀伤作用，初步观察RCAdC68.pIX-EGFP对结肠癌细胞增殖的影响。方法以黑猩猩型腺病毒AdC68为模板，利用等温组装法构建腺病毒衣壳蛋白pIX展示EGFP的重组溶瘤腺病毒质粒，HEK293细胞中

4、包装成完整病毒并扩增、纯化，获得具有溶瘤效应可表达EGFP的重组溶瘤腺病毒载体，命名为RCAdC68.pIX-EGFP。以不同的病毒剂量（100、500、2500、12500vp/cell）感染结肠癌细胞HCT116、NCI-H508、HT-29及人胚肾细胞HEK-293，分别于感染后第3、5、7天用MTT法检测RCAdC68.pIX-EGFP对不同细胞的抑制率，结晶紫染色实验检测RCAdC68.pIX-EGFP对不同细胞的杀伤作用，荧光显微镜与相差显微镜观察细胞形态学变化和病变情况。结果重组溶瘤腺病毒载体RCAdC68.pIX-EGFP构建成功。RCAdC68.pIX

5、-EGFP对结肠癌细胞HCT116、NCI-H508、HT-29的增殖抑制作用与病毒感染剂量及感染时间成正比，以500vp/cell病毒感染剂量感染细胞7天后，RCAdC68.pIX-EGFP对HCT116、NCI-H508、HT-29、HEK293细胞的抑制率分别为86.70%、96.85%、99.70%、99.99%，AdC68-ΔE1-EGFP的细胞抑制率分别为6.57%、11.46%、9.11%、99.99%，RCAdC68.pIX-EGFP与AdC68-ΔE1-EGFP对结肠细胞增殖抑制作用的差异有统计学意义（P＜0.05），而对HEK-293细胞增殖抑制作用

6、的差异无统计学意义（P＞0.05）。结论本研究成功构建重组溶瘤腺病毒载体RCAdC68.pIX-EGFP，RCAdC68.pIX-EGFP能显著抑制结肠癌细胞HCT116、NCI-H508、HT-29的增殖，初I中文摘要重组溶瘤腺病毒RCAdC68.pIX-EGFP的构建及其对结肠癌细胞增殖的影响步显示出RCAdC68.pIX-EGFP作为溶瘤病毒载体治疗肿瘤的潜能。关键词溶瘤腺病毒；等温组装；结肠癌；细胞增殖作者：石鑫指导老师：常树建II重组溶瘤腺病毒RCAdC68.pIX-EGFP的构建及其对结肠癌细胞增殖的影响英文摘要TheConstructionofOncoly

7、ticAdenovirusRCAdC68.pIX-EGFPandTheEffectofRCAdC68.pIX-EGFPontheProliferationofColonCarcinomaCellsAbstractObjectiveTheadenovirusvectorisoneofthemostwidelyusedoncolyticvirus.InordertoexploretheeffectofRCAdC68-EGFPoncoloncarcinomacellsproliferation,Isothermalassemblymethodw