甘肃天祝草原孢囊线虫种类鉴定和生态分布研究

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1、分类号密级UDC单位代码10733甘肃农业大学硕士学位论文甘肃天祝草原孢囊线虫种类鉴定和生态分布研究IdentificationofspeciesandresearchingonecologicaldistributionofcystnematodeinsteppeofTianzhuh,Gansu朱锐东指导教师李惠霞副教授（甘肃农业大学草业学院兰州730070）彭德良研究员（中国农业科学院植物保护研究所北京100081）学科专业名称植物病理学研究方向植物病原真菌与线虫学位答辩日期2015年5月30日学位授予日期2015年6月答辩委员会主席李春杰教授评阅人

2、李敏权研究员徐秉良教授2015年6月甘肃农业大学2015届硕士学位论文摘要禾谷孢囊线虫(Cerealcystnematode,CCNHeteroderaSPP.)是一类危害小麦(Triticumaestivum)、大麦(Hordeumvulgare)、燕麦(Avenasativa)等禾谷类作物的世界性重要病原线虫。禾谷孢囊线虫除为害小麦、大麦和燕麦等禾谷类作物外，一些多年生的禾本科植物科也可作为禾谷孢囊线虫的中间寄主或桥梁寄主。本研究根据甘肃省天祝草原农牧区的分布特征，系统的对禾谷孢囊线虫在天祝高寒草甸草原的发生、生态分布、孢囊线虫种类及优势种群进行了研

3、究。2013-2014年，采用随机采样法，对甘肃省天祝高寒草甸草原主要牧区的禾谷孢囊线虫进行了较系统的调查，调查范围覆盖了天祝县主要牧区和半农半牧区的13个乡镇。采集样共计本248份，其中56份样品中检出有孢囊线虫，占22.6%。通过镜检，所调查的13个乡镇，7个乡镇土样有孢囊线虫检出，检出率由高到低分别为打柴沟镇47.4%、塞拉隆乡46.7%、抓喜秀龙乡44.9%、石门镇40.0%、安远镇34.4%、大红沟乡11.1%和旦马乡9.8%。炭山岭镇、塞什斯镇、天堂镇、松山镇、祁连乡和哈溪镇土样中孢囊线虫检出率为0。抓喜秀龙乡一采样地点孢囊基数最高为54个/

4、100g土样。通过以010cm、1020cm、2030cm、3040cm为垂直采样标准，在已发现有孢囊线虫的40个样点进行分层采样研究天祝草原孢囊线虫的垂直分布情况，结果表明，孢囊线虫均布在010cm和1020cm土层中，30cm以下土样中未检出孢囊线虫，且所有土样中010cm孢囊线虫密度均大于对应土样的1020cm中孢囊密度。本研究应用形态学结合分子生物学鉴定，鉴定结果表明，甘肃天祝高寒草甸草原孢囊线虫优势种群为禾谷孢囊线虫（Heteroderavenae）。其形态学特征为孢囊浅褐色，阔柠檬形，阴门锥双膜孔，未见阴门下桥，泡状突明显。利

5、用通用引物AB28和TW81，通过PCR技术对禾谷孢囊线虫群体的核糖体基因的内转录间隔区（rDNA-ITS）序列的扩增，后经PCR产物纯化回收、克隆、测序，得到ITS区序列长度为1045bp，序列中无碱基插入和缺失，均有碱基替换。将所测得序列在Genbank和Blast上比对，下载近缘种序列，在MEGA5.2中运用UPGMA法构建系统发育树，结果显示，此禾谷孢囊线虫群体与H.avena群体相似度达99%～100%，进一步证实寄生于甘肃天祝高寒草甸草原牧草孢囊线虫均为H.avenae。ITS构建的系统发育树表明，本研究线虫群体与中国的I甘肃农业大学2015

6、届硕士学位论文禾谷孢囊线虫、俄罗斯的早熟禾孢囊线虫(H.pratensis)和德国的早熟禾孢囊线虫(H.pratensis)群体同时聚为一个小的分支，揭示了它们之间具有较高的亲缘关系。为了测定天祝牧草禾谷孢囊线虫（H.avenae）群体对小麦的致病力，采用室内人工接种的方法，将分离自嵩草和矮嵩草的2个禾谷孢囊线虫孢囊经低温处理后，将线虫卵接种至小麦“矮抗58”，每株3000粒卵，将接种的小麦苗置于15±2℃的培养室中，用镝灯灯管补光，每天光照14h。1周后，温度调至18±2℃。定期浇水，使PVC管内的土壤保持一定的湿度，75天后观察统计小麦根部和根际土壤

7、孢囊数。结果表明，天祝牧草禾谷孢囊线虫群体可以侵染小麦。关键词：天祝草原；禾谷孢囊线虫；嵩草；矮生嵩草；小麦；II甘肃农业大学2015届硕士学位论文SummaryCerealcystnematode(CCN,Heteroderaspp.)isakindofworldwideimportantpathogenicnematodeswhichparasitizethewheat(Triticumaestivum),barley(Hordeumvulgare),oat(Avenasativa)andothercerealcrops.Inadditiontoha

8、rmcerealcrops,CCNalsoparasitizesomeperen