猪腔前卵泡体外培养体系优化及参与卵泡腔形成的分子筛选

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1、：Ｓ８１４．８单位代码：１０３６４分冀号：１２７２０２５１：公巧学号密级签傲泉赴义ｆ学位论文猪腔前卵泡体外培养体系优化及参与卵泡腔形成的分子筛选ＯｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｉｎｖｉｔｒｏＣｕＵｕｒｅＳｙｓ１；ｅｍｏｆＰｒｏｃｉｎｅＰ化ａｎｔｒａｌＦｏｌｌｉｃｌｅｓａｎｄＳｃｒｅｅｎｉｎｇ化ｒＭｏｌｅｃｕｌｅｓＩｎｖｏｌｖｅｄｉｎＦｏ化ｃｌａｒＡｊｉ化ｕｍＦｏｒｍａｔｉｏｎ研究生；杨宏星指导教师：章孝荣教授合作指导教师；刘亚副教授申请学位口类级别－：农学硕上

2、临床兽医学专业名称：研究方向；兽巧产科学巧牛殖调控技术所在学院；动妆Ｉ科巧学院答辩委员会主席；＿二零一五年六月、＇AnhuiAgriculturalUniversityMasterDegreeThesisOptimizationofinvitroCultureSystemofProcinePreantralFolliclesandScreeningforMoleculesInvolvedinFolliclarAntrumFormationPostgraduate:YangHongxingTutor:Prof.ZhangXia

3、orongCo-tutor:Assoc.Prof.LiuYaCollegeofAnimalScienceandTechnology,AnhuiAgriculturalUniversity,Hefei230036Hefei,Anhui,P.R.ChinaJune,2015独创性声明本人声明所呈的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。踞我所知，除了文中特别加从巧注和致谢的地方过的研究成果，也不包含为夕ｈ，论文中不包含其他人已经发表或撰写获得安徽农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论

4、文中作了明确的说明并表示谢意。：觀学位论文作者签名在星…―签字日期少年；月日；学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解安徽农业大学有关保留、使用学位论文文的复印件和电子的规定，有权保留并向国家有关部ｎ或机构送巧论。本人授奴安徽农业大学可臥将学位论文件，允许论文被查阅和借阅《中国学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，收录到、、汇编文全文数据库》，可臥采用影巧缩印或扫描等复制手段保存。（保密的学位论文在解密后适学位论文，向社会公众提供信息服务用本授权书。）＾，碱学位论文作者盤名；戒＾處基指导教师签—矿年ｆ

5、旧签字日期月日签字日期：／月—学位论文作者毕业后去向：电话：工作单位：通信地址：邮编：本项研究受下列基金资助1.安徽农业大学“学科骨干培育计划”2.安徽省自然科学基金（1408085MKL40）3.安徽省科技攻关项目（1301032157）SUPPORTEDBY1.FoundationforDisciplineKeyScholarsofAnhuiAgriculturalUniversity2.NaturalScienceFoundationofAnhuiProvince(1408085MKL40)3.KeyTechnologiesR&DProg

6、ramofAnhuiProvince(1301032157)摘要卵泡腔形成阶段是腔前卵泡发育最为关键的阶段之一，自然状况下绝大部分卵泡会在此阶段发生闭锁退化。优化猪腔前卵泡体外培养体系，探究卵泡成腔机制，不仅可为猪胚胎工程研究与应用提供充足的卵源，而且可为提高人类腔前卵泡体外培养效率提供借鉴。本研究对猪腔前卵泡体外培养体系进行了优化，并对可能参与卵泡成腔的基因进行了筛选，试验内容如下：试验一、猪PFs-OGCs体外培养方式的比较。通过对猪PFs-OGCs体外有血清贴壁培养与无血清悬浮培养16.5d后，观察两种培养方法下的OGCs形态，并比较PFs-OGCs成活率、成腔率，发现

7、OGCs经体外悬浮培养与贴壁培养均能够形成腔样结构，但贴壁培养获取OGCs的成活率、成腔率显著高于悬浮培养(P<0.05)。试验二、猪PFs-OGCs体外贴壁培养培养时间的筛选。通过对猪PFs-OGCs体外贴壁培养16.5d、18.5d和20.5d后，比较PFs-OGCs成活率、成腔率、卵母细胞直径以及经IVM后成熟率，并对体外培养卵母细胞在皮质颗粒分布、ROS水平以及卵母细胞超微结构上与体内卵母细胞进行对比来评价卵母细胞质量。发现体外贴壁培养16.5d的PFs-OGCs内的卵母细胞直径显著小于18.5