豚鼠新鲜和冻融腔前卵泡体外培养的初步研究

《豚鼠新鲜和冻融腔前卵泡体外培养的初步研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、温州医学院硕士学位论文豚鼠新鲜和冻融腔前卵泡体外培养的初步研究姓名：吴永根申请学位级别：硕士专业：临床检验诊断学指导教师：周颖；林向阳2012-11温州医学院硕士学位论文————————-—————————————————_—--●-—--_-_——_●-_-___-___-●---_豚鼠新鲜和冻融腔前卵泡体外培养的初步研究中文摘要目的：本项目通过分离新鲜和冻融豚鼠卵巢腔前卵泡的体外发育，比较培养方式、培养液成分、卵泡入培直径和冻融过程对其存活率、成腔率、生长速度的影响，以探讨豚鼠腔前卵泡的体外培养体系的优化，期望为年轻高治愈率肿瘤患者冷冻保存卵巢组织内腔前卵泡

2、的将来临床应用提供理论和实验依据。方法：本研究采用酶消化结合机械分离法分离豚鼠卵巢腔前卵泡随机分组进行体外培养(除2组3组以外，其他均采用0．5％藻酸盐微球包埋卵泡置于含0．1IU／mlFSH的a．MEM培养液中三维培养)，比较(1)藻酸盐微球包埋卵泡三维培养和二维常规培养；(2)不同浓度藻酸盐微球包埋卵泡三维培养；(3)添加不同浓度FSH培养液三维培养；(4)单个卵泡和多个卵泡三维培养；(5)腔前卵泡体外培养初始直径；(6)冻融过程等对豚鼠腔前卵泡体外发育的影响，分别于培养0天(DO)、4天(D4)、8天(D8)和12天(D12)在倒置显微镜下观察卵泡形态，卵

3、母细胞与卵泡细胞分离情况，成腔率、OCTAXEyeware软件测量卵泡和卵母细胞直径变化等情况，D12采用LIVE／DEAD荧光染色共聚焦显微镜观察其存活率。结果：所有分离的腔前卵泡DO随机分组体外培养，各组卵泡初始直径均值无显著差异(P>0．05)。l、藻酸盐三维培养和二维常规培养组比较：体外培养的腔前卵泡直径逐渐增加，d12卵母细胞直径藻酸盐三维培养组(75．63+6．34urn)比较二维培养组(71．03+6．45um)差异有统计学意义(P<0．05)；d12卵母细胞存活率藻酸盐三维培养组(76．8％)比较二维培养组(56．4％)有显著性差异(P

4、)；d12藻酸盐三维培养组卵泡三维结构保存完好，而二维培养组有66．96％卵泡发生了卵母细胞与颗粒细胞分离。2、不同藻酸盐浓度(0．5％、1％、2％)微球包埋三维培养组比较：体外培养各时间段(D4、D8、D12)的三组(0．5％、1％、2％藻酸盐组)卵泡直径分别为D4组(357．534-52．79um：342．504-53．93um『：332．01±65．03urn)、D8组(416．33±86．02um：394．914-82．67：382．884-88．28um)、D12组(447．26±l15．54um：427．414-127．01um：432．684-14

5、0．77um)，比较均无统计学意义(P>0．05)，但体外培养12天后卵泡三维结构完整性卵泡数在低浓度(0．5％)藻酸盐微球包埋组中最高(88．990,4)，仅11．11％卵泡生长失去球形结构，而1％藻酸盐组有23．46％的卵泡温州医学院硕士学位论文失去球形结构，2％藻酸盐组有52．81％的卵泡失去球形结构；而D12成腔率(23．95％，20．63％，23．19％)、D12卵泡存活率(93．33％，90．00％，87．50％)、卵母细胞存活率(76．8％，68，09％，64，41％)，3组之间差异均无统计学意义(P>O．05)。3、不同浓度FSH组之间的比较：对

6、照组无添加FSH即OIU／mlFSH组卵泡生长缓慢，卵泡直径在D4、D8、D12(245．33+52．68urn；266．59+86．95urn：295．19±134．07urn)分别与0．011U／m1FSH组(342．70±69．29um；396．54±100．18um：413．01±141．77um)、0．1IU／mlFSH组(357．53±52．79urn；416．33±86．02urn：447．26±115．54urn)和1IU／mlFSH组(342．51±62．04urn；413．97±99．67um：446．55±121．33urn)比较差异均有统

7、计学意义(P<0．05)；D12成腔率对照组为(2．63％)，分别与各实验组(O．01Iu／mlFSH组、0．1IU／mlFSH组和IIU／mlFSH组)卵泡成腔率(26．32％，23．95％，26．19％)比较，均有统计学差异(PO．05)；D12卵泡存活率，0IU／mlFSH组(66．07％)与0．1IU／mlFSH组(93-33％)、lIU／mlFSH组(96．oo％)比较，差异有统计学意义

8、(P<0．05)：0．0