猪瘟病毒e2蛋白碳纳米管抗原的制备及其初步研究

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1、分类号UDC密级编号专业硕士学位论文猪瘟病毒E2蛋白碳纳米管抗原的制备及其初步研究PreparationandPreliminaryApplicationofClassicalSwineFevervirusE2ProteinUsingCarbonNanotubesasCarrier学位申请人：武德鹏指导教师：王选年教授合作教师：专业领域：兽医学位类别：兽医硕士2015年6月独创性声明本人声明，所呈交的论文是我个人在导师指导下完成的研究工作及取得的研究成果。据我所知，文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人已经发表或撰写过的

2、研究成果，也不包含为获得河南科技大学或其它教育机构的其他学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：日期：摘要摘要碳纳米管属于石墨烯家族，具有较强的跨细胞膜能力，经过功能化的碳纳米管能够携带多种有机或无机粒子，如蛋白质、核酸和化学药物等活性分子进入细胞内部，激活先天性免疫细胞，如单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞等。目前国内外学者对碳纳米管的研究主要集中在针对于肿瘤的诊断和治疗方面，随着对碳纳米管的深入研究，越来越多的学者开始关注碳纳米管在疫苗载体方面的应用。猪

3、瘟(classicalswinefever,CSF)是由猪瘟病毒（classicalswinefevervirus,CSFV）感染猪所引起的一种高致病性接触性传染病，在养猪业中危害非常严重。E2蛋白是猪瘟病毒的主要保护性抗原，含有猪瘟病毒高度保守的抗原决定簇，能诱导机体产生猪瘟病毒的中和抗体。为探究碳纳米管作为疫苗载体对动物免疫的影响，本实验通过制备碳纳米管-猪瘟病毒E2蛋白抗原，免疫小鼠后，检测抗体效价，以评估碳纳米管颗粒疫苗对免疫的影响。本实验主要包括三个部分：1）用大肠杆菌进行诱导表达CSFV-E2蛋白，SDS-PAGE鉴定

4、重组蛋白E2的表达形式，采用His标签镍柱亲和层析法进行纯化，并经WesternBlot鉴定表达蛋白的抗原特异性。2）用EDC/NHS作偶联剂，将纯化后的重组蛋白E2与羧基化多壁碳纳米管偶联，制备成碳纳米管-E2蛋白抗原，并通过考马斯亮蓝法检测连接蛋白量。3）以碳纳米管-E2蛋白、E2蛋白、弗氏佐剂-E2蛋白免疫小鼠，两次免疫，间隔两周，于二免后第10天，使用间接ELISA检测抗体效价。结果：经考马斯亮蓝法检测后，测得1mg羧基化多壁碳纳米管连接蛋白量为480μg。E2蛋白组抗体效价最高达到1:3200，碳纳米管-E2蛋白组抗体效

5、价最高达到1:12800，弗氏佐剂-E2蛋白组抗体效价最高达到1:51200。结论：本研究通过构建碳纳米管-E2蛋白抗原，并对小鼠进行免疫，通过ELISA检测，证明碳纳米管能够增强免疫反应，促进机体特异性抗体的产生。关键词：碳纳米管；猪瘟病毒；E2蛋白；疫苗。论文类型：选题来源：IABSTRACTABSTRACTAsamemberofthegraphenefamily,carbonnanotubes(CNTs)havetheabilitytocrosscellmembranes,CNTswithchoicelydesignedwh

6、ichareabletoentercellsascarriersofavarietyoforganicorinorganicparticles,suchasproteins,nucleicacidsandchemicaldrugs.CNTswereshowntoactivatecellsfromtheinnateimmunesystem,suchasmonocytes,macrophagesanddendriticcells.Theresearchesofcarbonnanotubesalwaysfocusedontumordia

7、gnosisandtreatment.Withthein-depthstudyofcarbonnanotubes,moreandmorescholarsbegintopayattentiontotheapplicationofcarbonnanotubesasvaccinationscaffolds.Theclassicalswinefever(CSF)causedbytheclassicalswinefever(CSFV)infectioninpigsishighlyvirulentandcontactdisease.Itbri

8、ngsserioushazardinthepigindustry.TheglycoproteinE2ofCSFVisrecognizedasakindofmajorprotectiveantigenatpresent,andcaninduceneu