猪流行性腹泻病毒（pedv）s基因功能域与其细胞适应性的关系

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1、分类号Ｓ８巧／７Ｔｗ学号舅亂菊请農毒义據硕±学位论文猪流行性腹泻病毒（ＰＥＤＶ）Ｓ基因功能域与其细胞适应性的关系喻利＊？＞＊．－■－—Ｉ＇＇■，■，＞指导教师李震研究员■张源淑教授■、．／．专业学位兽医硕壬、？．■研究领域基础兽医学研究方向动物生物化学答辩日期二〇—五年五月＇Ｉ■Ｉ＇＇＇？？，ＰＯＲＩＮＥＥＰＩＤＥＭＩＣＤＩＡＲＲＨＥＡＶＩＲＵＳＳＧＥ

2、ＮＥＤＯＭＡＩＮＡＮＤ打ＳＣＥＬＬＡＤＡＰＴＩＢＩＬＩＴＹＢｙＹｕＬｉＳｕｅｒｖｉｓｅｄｂＩｎｖｅｓｔｉａｔｉｏｎＰｒｏｆ．ＬｉＺｈｅｎｐｙｇ＆Ｐｒｏｆ．ＺｈａｎＹｕａｎｓｈｕｇＡＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎＳｕｂｍｉｔｔｅｄｔｏＮａｎｉｎＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｊｇｇｙｎｒｕｅ？ＩＰａｔｉａｌＦｌ打ｌｌｍｅｎｔｏｆ化民ｅｕｉｒｅｍｅｎｔｓｆｏｒ也ｅＭａｓ化ｒＰｒｏｑｆｅｓｓｉｏｎａｌＤｅｒｅｅｉｎＶｅ

3、ｔｅｒｉｎａｒＭｅｄｉｃｉｎｅｇｙＣｏｍｌｅ化ｄｉｎＡｒｉｌ２０１５ｐｐ，Ｃｏｍｍｅ打ｃｅｍｅｎｔｉｎＭａ２０１５ｙ，原创性声明，是本人在导师的指导下本人郑重声明：所呈交的学位论文，独立进行研究工作所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研巧做出重要贡献的个人和集体，均己在文中明确方式标明。。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担■Ｐ如ｆｓｙ月名日学位论文作者（需亲笔）签名；而利年学位论文

4、版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并。向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅本人授权南京农业大学可Ｗ将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可采用影印。、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文保密□，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密＾上方框＂＂（请在内打Ｖ））７。｜＾＼？Ｓ学位论文作者（需亲笔签名：年月日导师（需亲笔＞签名：妊Ｓ月方》日目录摘要ＩＡＢＳＴ

5、ＲＡＣＴＩｌｌ中英文缩略词表Ｖ前胃ＶＩＩ第一篇文献综述一第章猪流行性腹泻（ＰＥＤ）１１流行病学１２临床及剖检症状４３诊断和防制４第二章猪流行性腹泻病毒ＰＥＤＶ７（）１冠状病毒概述７２ＰＥＤＶ分子结构及遗传特征９２１ＰＥＤＶ分子结构９．２．２ＰＥＤＶ的基因姐结构１０３ＰＥＤＶ的理化、生物学特性ＩＩ４ＰＥＤＶ的细胞培养特性１２第呈章Ｓ蛋白与ＰＥＤＶ细胞适应性关系研究进展１３１ＰＥＤＶＳ蛋白与细胞适应性１３

6、２ＲＮＡ重组１６基于技术的反向遗传学操作系统研究进展１３本研巧的目的及意义７第二篇实验研巧第四章现有转移载体对应毒株的捶救１９１实验材料２０．１１细胞和蘭种２０１．２质粒２０１３２０．酶及主要试剂、试剂盒１．４主要仪器２１１．５分析软件２２１猪流性腹泻病毒ｓ基因功能域与其细胞适应性的关系２实验方法２２２．１ＶＥ民０、ＬＲ７细胞的复苏、传代、冻存２２２２ＶＥＲ０２４．细胞膜酶适应浓度验证２３ｍＰＥＤＶ病毒的增殖、２４

7、．收毒及滴度测定２４感２５．受态的制备２．５转移载体的克隆和扩增２５２、酶切鉴定、浓度测定％乂质粒提取２．７质粒线性化、纯化、浓度测定２６２．８体外转录ＲＮＡ、ＲＮＡ电泳鉴定２７２９ＲＮＡ２７．电击转染２．１０重组病毒传代２８２ｉ．１１ＲＬＵＣ巧２８值定ｊ２－．１２重组病毒ＲＮＡ提取、民ＴＰＣ氏２８３０２．１３重组病毒基因序列分析２．１４核酸电泳３０２１５３０．常用试剂的配制３实验结果３１３１ＶＥＲＯ３１．细胞族酶

8、适应浓度３２ｍＰＥＤＶ３１．滴度３３３１．转移载体酶切鉴定结果及浓度．３３４转移载体线性化纯化浓度１３．５体外转录ＲＮＡ电泳鉴定３２３２３．６重组病毒传代观察结果３．７民ＬＵＣ３３值３８－ＰＣＲ结果３４．重组病毒ＲＮＡＲＴ３．９重组病毒Ｓ基因和ＲＬＵＣ基因序列分析结果３４４３５職第五章基于Ｓ基因功能域的转移载体的构建３７１实验材