猪流行性腹泻病毒hbmc2012株的致病性与免疫研究

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1、_^^fAGRICULTURALUNIVERSITYOFHEBEI硕士学位（毕业）论文猪流行性腹泻病毒HBMC/2012株的致病性与免疫研究学位申请人：朱卫霞指导教师：宋勤叶教授学科专业：预防兽医学学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二〇一五年五月二十四讀分类号：S855.3单位代码：10086密级：公开学号：2012359猪流行性腹泻病毒HBMC/2012株的致病性与免疫研究PathogenicityandImmunityStudyofPorcineEpidemicDiarrheaVirusStrainHBMC/2012学位申请人：朱卫霞指导教师：宋勤叶教授学科专业：预防兽

2、医学学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二〇一五年五月二十四独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得河北农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：yar年Jr月对円学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解河北农业大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅

3、和借阅。本人授权河农业大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签名：年如4签字日期：乂比年丨月、円签字日期：M丨年1月、円学位论文作者毕业后去向：工作单位：电话:通讯地址：邮编:摘要猪流行性腹泻（PED）是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起猪的一种高度接触性的急性肠道传染病，主要以呕吐、水样腹泻和脱水为特征。2010年以来，我国多个地区突然爆发由PEDV变异株引起的初生仔猪腹泻，其临床症状、发病率和死亡率均较此前常见的PED严重，给养猪业造成了巨大的经济损失。

4、目前对PEDV的致病性与免疫特征了解不够深入，缺乏标准防控程序，本研究旨在探索PEDV流行毒株与宿主间的感染免疫特性，为进一步阐明该病的发病机制奠定基础。用自河北省某猪场分离的PEDVHBMC/2012株分别感染3日龄和21日龄健康仔猪，评价该毒株的致病性。3日龄仔猪感染后2-3d（dpi）出现严重的腹泻和呕吐等典型症状，持续3d左右逐渐好转，感染后8h即可在肛拭子中检测到病毒，并一直持续到实验结束（13d）。剖检可见小肠壁变薄，肠绒毛脱落或增粗，内充满淡黄色内容物，部分小肠内充满气体，肠系膜淋巴结出血。21日龄仔猪的临床表现较3日龄仔猪轻，感染后2d出现不同程度的腹泻，没有出现呕吐症状，

5、病理变化也较轻。感染后3、7d在血清和肠道内可检测到病毒核酸，感染后23d在相应样品内未检测到。免疫组化检测发现PEDV主要分布在小肠的中后段，小肠绒毛上皮细胞内的病毒检出率最高。该结果表明PEDVHBMC/2012毒株具有明显的致病性，其所致疾病的严重程度与日龄密切相关。进而通过流式细胞术、ELISA和免疫组化等手段，评价PEDV感染21日龄仔猪的全身和局部免疫反应及相关免疫分子的变化。感染后19d（dpi）仔猪体内的抗体水平达到高峰，感染++-早期（3dpi），外周血淋巴细胞（PBMC）的特异增殖能力有所提高，CD3CD4CD8Th、+-++----+CD3CD4CD8Tc、CD3CD

6、4CD8γδT和CD3CD4CD8细胞亚群的含量显著增加；7dpi，--+++-+-+CD3CD4CD8细胞显著低于对照组，CD3CD4CD8Th、CD3CD4CD8Tc细胞含量回落，与+--对照组无显著差异，而CD3CD4CD8γδT的含量仍然极显著高于对照组。感染后3d，感染+++组CD3CD4CD8Tm细胞亚群含量显著低于空白对照组，而感染后7d高于空白对照组，但两组差异不显著。该结果提示PEDV能够诱导机体特异性免疫应答，不同T细胞亚群参与了免疫应答。PEDV感染仔猪的十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠与肠系膜淋巴结等局部组织中的肥大++细胞、单核-巨噬细胞以及SWC1a或/和SWC

7、8的粒细胞增多，杯状细胞分泌MUC2的功能明显下降，但是肠系膜淋巴结细胞的增殖活性没有明显变化。此结果表明肥大细胞、单核-巨噬细胞以及粒细胞等均参与了局部免疫反应，肠道黏膜MUC2黏蛋白含量的降低可能是PEDV导致仔猪腹泻的关键因素。对PEDVHBMC/2012株致病性与感染免疫特性的初步探索，可以为进一步阐明该病毒的致病与免疫机制提供科学依据。关键词：猪流行性腹泻；HBMC/2012株；致病性；全身免疫；局部免疫Pat