猪传染性胃肠炎病毒spike蛋白抗原位点c和d的原核表达

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1、巧■‘秩ｆ；鐵两；、’’，＇；蠻专！齐齐哈尔大学＜＾＇’＇ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＱＩＱＩＨＡＲ硕±学位论文猪传染性胃肠炎病毒Ｓｐｉｋｅ蛋白抗原位点Ｃ和Ｄ的原核表达生物学学科专业；—作者姓名：朱可佳－ｊ天飞＾指导教师：于２０１５年４月３０日论文提交日期：２０１５年目月１３曰论文答辩日期：平京：＿鞋答辩委员会主席论文评阅人：任程萍坦＿＿＿遞‘？－式ｐｔｔ■－、．■齐齐哈尔大学学位论文独创性声明作者郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师

2、的指导下进行研究工作所取得的成栗。尽我所知，除文中己经注明引用内容和致谢的地方外，本论文不包含其他个人或集体已经发表的研究成果，也不包含其他己申请学位或其他用途使用过的成果一。与我同工作的同志对本研究所做的贡献均己在论文中做了明确的说明并表示了谢意。若有不实之处，本人愿意承担相关法律责任。学位论文题目：猪传染性胃肠炎病毒Ｓｐｅｉｋ蛋白杭原位点Ｃ和Ｄ的原核呆达作者签名：日期：ｌｏｕｒ年备月如日＾幸夺＿句齐齐哈尔大学学位论文版权使用授权书本人完全了解学校有关学位论文知识产权的规定，在校攻读学位期间。论文工作的

3、知识产权属于齐齐哈尔大学，允许论文被查閑和借阅学校有权保留论文并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，可化将、本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可化采用影印。缩印、或担描尊复制手段保存和汇编本学位论文学位论文题目：裙传染巧胃肠榮病毒Ｓｐ化ｅ蛋白杭原位点Ｃ和Ｄ的原核表达曰期：年６月扔？曰作者签名：日期：Ｘ姐年＾月此曰＿导师签名：Ｚ￡硕士学位论文猪传染性胃肠炎病毒Spike蛋白抗原位点C和D的原核表达ProkaryoticExpressionofTransmissibleGastroenter

4、itisVirusSpikeProteinCandDAntigenicSites作者姓名：朱可佳学号：2012906160学科专业：动物学研究方向：动物免疫学指导教师：于天飞副教授答辩日期：2015年6月13日齐齐哈尔大学QiqiharUniversity，MastersDegreeDissertationProkaryoticExpressionofTransmissibleGastroenteritisVirusSpikeProteinCandDAntigenicSitesCandidate：ZHUKe-jiaStudentnumber:2012

5、906160Major：ZoologyAcademicField：ZoogenicImmunologySupervisor：AssociateProfessorYUTian-feiReplyDate：2015-6-13齐齐哈尔大学硕士学位论文摘要猪传染性胃肠炎（Transmissiblegastroenteritis，TGE）是猪的一种急性，高度接触性传染病。该病由猪传染性胃肠炎病毒（Transmissiblegastroenteritisvirusofswine，TGEV）引起。各种年龄及品种的猪对TGE均易感，其中2周龄以下仔猪的死亡率可达100

6、%，严重危害养猪业的发展。本研究分别合成了编码TGEV纤突蛋白（spike蛋白）线性抗原位点C和D的核苷酸片段，正反链退火后分别克隆至原核表达载体pET32a中，重组质粒分别命名为pET32a-C1C2和pET32a-D。同时将D片段克隆至重组质粒pET32a-C1C2中，重组质粒命名为pET32a-C1C2D。将上述3种重组质粒pET32a-C1C2、pET32a-D和pET32a-C1C2D分别转化大肠杆菌Rosetta（DE3），重组菌经1.0mmol/L的IPTG诱导4h后，分别表达出21kDa、22kDa和25kDa的重组蛋白。重组蛋白切胶

7、纯化。Westernblot和Dot-ELISA检测结果表明，3种重组蛋白能被TGEV阳性血清识别。对重组蛋白诱导时间和IPTG浓度等表达条件进行了初步优化。重组菌Rosetta（DE3）（pET32a-C1C2）重组蛋白表达量从38.0%提高到41.4%；重组菌Rosetta（DE3）（pET32a-D）重组蛋白表达量从30.9%提高到33.8%；重组菌Rosetta（DE3）（pET32a-C1C2D）重组蛋白表达量从15.7%提高到26.5%。本研究为TGEV血清学诊断方法的研究及建立提供了必要的物质基础。关键词：猪传染性胃肠炎病毒；Spike

8、蛋白；抗原位点；原核表达-I-猪传染性胃肠炎病毒Spike蛋白抗原位点C和D的原核表达Prokaryotic