烧伤对成年大鼠认知功能损害和海马区s100β表达的研究

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1、中文摘要目的：谵妄是一种急性非特异性实质脑器官的功能紊乱。大面积烧伤可导致谵妄的发生，烧伤合并谵妄患者死亡率增加、愈后质量差。但烧伤所致谵妄的机制尚不清楚，并且对于谵妄的诊断尚无确切的生物学指标。目前，临床上仅能依据精神疾病量表、脑电图粗略地判断患者的谵妄状态等。由于这些方法存在客观性、准确性等方面的缺陷，无法对谵妄的预防和发展进行有效干预、对严重程度进行客观地评估。因此本论文通过对大面积烧伤成年大鼠认知功能损害的观测，探讨海马S100β蛋白与认知障碍相关性，旨在为烧伤谵妄，提供客观准确、方便快捷的诊断依据，从而提高患者愈后质量。方法：实验动物均雄性健康成年Wist

2、ar大鼠，鼠龄90天，体重280-300g，由吉林大学动物实验中心提供。室温为20℃，昼夜周期12小时更替，给予充足食水。所有大鼠均在上述环境下饲养7天。一、成年大鼠大面积Ⅲ度烧伤模型建立Wistar大鼠将铜块置于水浴锅（95-100℃）1分钟，并接触鼠背皮肤持续30秒（如图3.2）。HE染色检测大鼠背部皮肤组织学改变，该烧伤深度累及全层皮肤，并且皮肤附属器遭到破坏。（如图3.3）即大鼠鼠背烧伤程度为Ⅲ度。大鼠随机分空白对照组（8只），烧伤组（分为烧伤后1d、3d、5d、7d、14d、21d每组各8只）。I烧伤组Wistar大鼠具体实施步骤：将铜块置于水浴锅（95-

3、100℃）1分钟，并接触鼠背皮肤持续30秒。随后，依据Parkland补液公式给予烫伤鼠乳酸林格氏液腹腔注射，进行液体复苏，并置于恒温毯（38-40℃）中进行保温，大鼠恢复自主活动，即造模完成。空白对照组Wistar大鼠不施以热力损伤。给予相同饲养和处置环境，以保证实验条件的一致性。二、空间学习、认知能力—Morris水迷宫该装置为一个径为150cm水深50cm的圆形黑色水槽（水温20-22℃），一个黑色平台置于直水平面下1.0cm，水槽四周设立不变标志物，保证从实验开始至结束水槽外周环境因素恒定不变，大鼠根据该标志物确定找到平台的游行路线。大鼠在烧伤前五天进行水迷

4、宫训练，每日一次。根据实验规定，将水槽等分为四个象限，将大鼠置于与平台所在象限的对立象限，大鼠面对水槽壁，然后放入该象限中，自由游泳120s，或大鼠找到平台，该大鼠实验终止，若120s内大鼠未到达平台，则引导其找到平台，并且在平台上驻足3s，以便于观察周围环境，上述实验往复进行。（如图3.4）第5日训练完毕后，将空白对照组及烧伤组（1d、3d、5d、7d、14d、21d各8只大鼠）重复水迷宫实验，测定各组能否记忆平台的位置。垂直水槽上方的摄像头观察和记录大鼠游泳的速度、到达平台所用的时间以及大鼠游行路线。三、S100β蛋白ELISA实验1、S100β蛋白提取①称重：

5、大鼠海马样本天平称重，按照100mg/1ml加入裂解液②匀浆：将组织样本切碎，加入匀浆器，再加入1ml裂解液，II反复抽提25-30次，于冰上进行，匀浆完毕在冰上裂解30min。③离心：利用低温离心机，1000g4℃离心10min。④振荡：沉淀加入100-150ul含有PMSF裂解液，超声震荡3秒，3次⑤再离心：取上清再次离心12000r4℃10min后取上清，提取蛋白。2、S100β蛋白ELISA测定①包被过程②封闭酶标反应孔③加入待检测样品④加入酶标抗体⑤加入底物液⑥终止反应⑦结果判断3、观察4、统计学方法：结果：一、Morris水迷宫路线图1、前5日成年大鼠M

6、orris训练图第1日，大鼠Morris水迷宫路线图，大鼠沿着水槽内壁游行，在120s实验期间并未成功踏上平台（如图3.5）。第3日，大鼠Morris水迷宫路线图，大鼠沿着水槽内壁和水槽内部游行，在120s实验期III间内成功踏上平台（如图3.6）。第4日，大鼠Morris水迷宫路线图，大鼠很少沿着水槽内壁游行，且路线较规整，在120s实验期间并成功踏上平台（如图3.7）。第5日，大鼠Morris水迷宫路线图，大鼠游行线路交之前规整，在120s实验期间并成功踏上平台（如图3.8）。2、空白对照组大鼠Morris训练图第1、3、5、7、14、21日，大鼠Morris水

7、迷宫路线图，大鼠几乎径直游行到平台，成功踏上平台（如图3.9、如图3.16）3、烧伤实验组大鼠Morris训练图第1、3、5、7、14、21日，大鼠Morris水迷宫路线图，大鼠游行路线逐渐变为复杂，游行方式由径直转向沿壁，由成功登上平台到120s未完成实验（如图3.10-3.15）二、空白对照组和实验组大鼠游行速度、游行距离以及到达平台时间利用Morris水迷宫系统记录和观察，游行的距离（见表3.1）、达平台的时间（见表3.2）和速度（见表3.3）。游行路程上看，当烧伤干预之后大鼠游行的路程有着明显的升高，随后又有所回落（如图3.18、3.20），游行时间来无