水稻ogg1基因的功能分析

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2、＇＞’苗＼Ａ直寶稱酱‘护南Ａ芦視中Ｖｖ葛艇，诉ｆ研究生姓名俩艳冰￣．■ＩＩ．，山■，ｙ导教师王志龙教授？：指王国梁教授学科专业作物遗传育种研究方向㈱細３：程侵震－議ｉ１分类号￥１密级ＵＤＣ单位代码卿斋祭皮丈＃硕±学位论文水稻ＯＧＧ／基因的功能分析Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌａｎａｌｙｓｉｓｏｆ０（７（７／ｉｎｒｉｃｅ研究生姓名何艳冰指导教师王志龙教授王国梁教授学科专业作物遗传育种硏究方向作物基因工程论文答辩

3、日期２０１５年６月１３日答辩委员会主席刘勇论文评阅人刘爱民、何录秋、暴明建二〇—五年六月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在指导老师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得湖南农业大学或其它教育机构的学位或证一书而使用过的材料。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。／研究生签名：时间；０年＾月曰＞／若／关于论文使用授权的说明本人完全了解湖南农业大学有关保留

4、、使用学位论文的规定：学校有权保留，即送交论文的复印件和电子稿，允许论文被查阅和借阅，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意湖南农业大学可Ｗ用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容，并同意将由此产生的收益捐贈给学校教育基金会用于发展研究生教育。（保密的学位论文在解密后鱗守此协议）研究生签名：时间：年日／：＾＾＾导师签名：时间：）＾（＾年＾月（曰７摘要摘要－ｏｘｏｕａｎ－０ＧＧ１８ｇｉｎｅＤＮＡｌｙｃｏｌａｓｅ为８経基鸟噴岭ＤＮＡ糖昔酶，主要修复（ｇ巧）ＤＮＡ氧化损

5、伤，维护ＤＮＡ及基因组稳定，人ＯＧＧ／（ＡＯＧＧ／）突变易诱发多种肿瘤。已有研究表明拟南芥０ＧＧ７（Ａ０ＧＧ７）与种子成熟和萌发有关，影响种子寿命，但尚不清楚水稻０ＧＧ７（化ＯＧＧ／）在ＤＮＡ氧化损伤修复、逆境胁迫及种子寿命调控的作７用模式。为剖析化０ＧＧ功能，我们构建了化ＯＧＧｉ超表达、ＲＮＡｉ、亚细胞定位、原核细胞表达及启动子持久表达载体，获得了相应的转基因株系。随后，我们对转基因株系及有关材料进行分子验证与功能分析，包括启动子活性检测，烟草细胞瞬时表－达，胁迫处理与基因表达及从大肠杆苗纯化ＧＳＴＯｓＯＧＧｌ蛋白等。结

6、果如下：（Ｓ染色分析表明，化０ＧＧＪ起始密码子前１３３ＯＧＵ１ｂｐ片断能启动ＧＵＳ基因表达，具有启动子活性。（２）烟草细胞共聚焦英光观察显示ＯｓＯＧＧｌ定位于细胞核。（３）农杆菌介导法转化水稻日本晴，获得了超表达和ＲＮＡｉ沉默转基因Ｔ｜代植株分别为３８株和５４株，通过对转基因植株的分子鉴定，已筛选获得６个超表达和９个ＲＮＡｉ沉默转基因阳性株系的Ｔ２代种子，我们将鉴定获得单拷贝的超表达和ＲＮＡｉ沉默转基因Ｔ２代纯系，用于后续试验分析。°（４）Ｄｔｔ水稻幼苗非生物胁迫（二甲基紫精３０ｊＭｉｍｅｔｈｌａｍｅｈｓ、高温３８

7、Ｃ、低｜ｙｙ°温４Ｃ、高盐２５０ｍＭＮａＣｌ和高渗２０％ＰＥＧ６０００）实验表明，二甲基紫精诱导的ＯＤ一化ＯＧＧ７表达与超氧化物歧化酶（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ，Ｓ）活性变化趋势致，高盐、高温及低温处理均在３ｈ处抑制化ＯＧＧ／表达，高渗透压处理诱导表一一达，表明与非生物胁迫有定关联，其作用机理有待进步研究。５（）２４ｈ时、水稻种子萌发试验显示在种子吸涨，日本晴超表达和ＲＮＡｉ沉默株系的化ＯＧＧ／表达量最高，表明化ＯＧＧ７可能与水稻种子萌发有关。（６）原核表达ＯｓＯＧＧｌ蛋白及纯化了ＯｓＯＧＧｌ，

8、并获得了ＯｓＯＧＧｌ多克隆抗体，为ＯｓＯＧＧｌ介导的ＤＮＡ氧化损伤修复功能鉴定提供了基础